產(chǎn)品編號

PC169
Human Cortisol ELISA Kit
96次

3198

的Human CortisolELISA Kit(Human CortisolEnzyme-Linked ImmunoSorbent AssayKit)，即人皮質(zhì)醇酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿、唾液及細胞培養(yǎng)上清液中的皮質(zhì)醇的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結(jié)果表明，最小檢出量為78pg/ml，與11-脫氧皮質(zhì)醇的交叉反應性為0.9%，與氫化潑尼松的交叉反應性為5.6%，與皮質(zhì)酮的交叉反應性為0.6%，與脫氧皮質(zhì)酮、孕酮、17-己酸羥孕酮、睪酮、雌三醇、達那唑等的交叉反應性小于0.1%板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
皮質(zhì)醇(Cortisol)，也稱氫化可的松(Hydrocortisone)或化合物F(Compound F)，是從腎上腺皮質(zhì)中提取的對糖類代謝具有最強作用的腎上腺皮質(zhì)激素，屬于糖皮質(zhì)激素的一種。皮質(zhì)醇有多種作用，但最為人所熟知的就是它對新陳代謝和免疫系統(tǒng)功能的影響。它是膽固醇的代謝物和其它類固醇激素激素如鹽皮質(zhì)激素、雌激素、雄激素和孕激素的前體。皮質(zhì)醇水平由下丘腦-垂體-腎上腺軸(hypothalamic-pituitary-adrenalaxis,HPAaxis)控制。垂體前葉釋放的促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone, ACTH)調(diào)控腎上腺皮質(zhì)分泌皮質(zhì)醇。ACTH的分泌受到促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin-releasing hormone, CRH)和精氨酸加壓素(arginine vasopressin)等多肽的調(diào)控。而皮質(zhì)醇對CRH的釋放具有抑制作用。正常的皮質(zhì)醇代謝遵循一種生理節(jié)奏，是一個周期為24小時的循環(huán)，一般皮質(zhì)醇水平最高點在早晨約6-8點，最低點在凌晨約0-2點。
大約由90%的皮質(zhì)醇與結(jié)合蛋白相結(jié)合，主要是皮質(zhì)類固醇結(jié)合球蛋白(corticosteroid-binding globulin, CBG)，但是皮質(zhì)醇一般在游離的條件下發(fā)揮生理效應，也有一些證據(jù)表明CBG結(jié)合形式也可能作為一種生物介質(zhì)。游離皮質(zhì)醇穿過細胞膜進入胞漿，與廣泛表達的糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoid receptor, GR)結(jié)合。雖然目前只有一個GR基因被鑒定出來，但至少有兩個選擇性剪接的亞型(α以及β)存在并可能具有不同的表達模式和活動。一般認為，激素/受體復合物作為二聚體進入細胞核，在那里通過結(jié)合糖皮質(zhì)激素反應元件(glucocorticoid response elements, GRE)調(diào)控轉(zhuǎn)錄。除了GR外，皮質(zhì)醇與鹽皮質(zhì)激素受體(mineralcorticoidreceptor, MR)具有一定的親和力，MR是醛固酮(aldosterone)的典型受體。
本試劑盒采用競爭法ELISA(Competitive ELISA)檢測樣品中Cortisol的濃度，其原理見圖1。高特異性識別Cortisol的抗體已預包被于酶標板上，同時加入樣品和辣根過氧化物酶標記Cortisol，樣品中的Cortisol與辣根過氧化物酶標記Cortisol競爭性結(jié)合酶標板中包被的抗體。隨后洗去游離的Cortisol與游離的辣根過氧化物酶標記Cortisol。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的TMB氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。如果樣本中Cortisol含量越多，則與抗體結(jié)合的辣根過氧化物酶標記Cortisol就越少，顏色越淺，即顏色與樣品中的濃度成反比。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。Cortisol濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中Cortisol濃度。

圖1.競爭法ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：

產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝

PC169-1
Cortisol抗體預包被板
8孔×12條

PC169-2
樣品稀釋液
16ml

PC169-3
Cortisol標準品
2管

PC169-4
辣根過氧化物酶標記Cortisol
2-4瓶

PC169-5
洗滌液(20X)
30ml

PC169-6
TMB溶液
10ml

PC169-7
樣品酸化液
10ml

PC169-8
樣品中和液
10ml

PC169-9
終止液
5ml

PC169-10
封板膜(透明)
2張

PC169-11
封板膜(白色)
2張

—
說明書
1份

保存條件：
辣根過氧化物酶標記Cortisol 4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除辣根過氧化物酶標記Cortisol外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
唾液中含有皮質(zhì)醇，所以建議實驗時佩戴口罩和手套，以免樣品被污染。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證辣根過氧化物酶標記Cortisol的精確性，辣根過氧化物酶標記Cortisol復溶后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應結(jié)果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結(jié)果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。