產(chǎn)品編號(hào)
JJP61
Human IL-33 ELISA Kit
96次
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的Human IL-33 ELISA Kit (Human Interleukin-33 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白細(xì)胞介素33酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-33的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為28pg/ml，與人的pro-IL-33, IL-1α，IL-1β，IL-18及小鼠IL-33沒(méi)有交叉反應(yīng)性，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
白細(xì)胞介素-33 (Interleukin-33, IL-33)，是一種分子量為30kDa的促炎性蛋白。IL-33主要表達(dá)在平滑肌細(xì)胞和氣道上皮細(xì)胞中，當(dāng)細(xì)胞受到炎性刺激時(shí)，IL-33的表達(dá)會(huì)出現(xiàn)上調(diào)。小鼠IL-33首先編碼合成具有266個(gè)氨基酸的前體分子，其N端具有細(xì)胞核定位信號(hào)區(qū)域和helix-turn-helix結(jié)構(gòu)，C端在結(jié)構(gòu)上與IL-1家族具有一定的相似性。全長(zhǎng)IL-33能夠與核染色質(zhì)相互作用，并發(fā)揮轉(zhuǎn)錄阻遏蛋白的作用。利用Caspase-1樣蛋白酶對(duì)全長(zhǎng)IL-33分子進(jìn)行酶切，會(huì)得到分子量為18kDa的分泌型成熟IL-33分子。成熟的人IL-33與小鼠和大鼠IL-33分別具有57%和59%的氨基酸同源性。
成熟的IL-33能夠與跨膜受體JJP20L/IL-1 R4結(jié)合，在IL-1 R3的協(xié)助下，完成IL-33依賴的NF-κB激活。對(duì)受體JJP20L的選擇性剪切會(huì)得到游離的誘騙受體JJP20，JJP20與IL-33的結(jié)合會(huì)封閉JJP20L信號(hào)通路，抑制IL-33對(duì)免疫及心臟方面的作用效果。在哮喘和心力衰竭的患者中，JJP20水平會(huì)顯著升高。
分泌型IL-33分子能夠促進(jìn)Th2型免疫應(yīng)答，導(dǎo)致嗜酸性粒細(xì)胞增多癥和過(guò)敏反應(yīng)。在Th2細(xì)胞中，IL-33能夠上調(diào)IL-4、IL-5、IL-13以及JJP20L的表達(dá)。在肥大細(xì)胞中，IL-33能夠增強(qiáng)部分細(xì)胞因子和趨化因子的產(chǎn)生，但是并不會(huì)引發(fā)細(xì)胞脫粒。IL-33/JJP20L系統(tǒng)對(duì)于心臟具有一定的積極作用，IL-33能夠減輕由血管緊張素II或苯腎上腺素造成的心肌細(xì)胞肥大，機(jī)械壓力會(huì)誘導(dǎo)心臟成纖維細(xì)胞和心肌細(xì)胞各自產(chǎn)生IL-33和JJP20。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中人IL-33的濃度，其原理見圖1。人IL-33特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人IL-33會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人IL-33抗體后，生物素化抗人IL-33抗體與人IL-33結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。人IL-33濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
JJP61-1
人IL-33抗體預(yù)包被板
8孔×12條
JJP61-2
樣品分析緩沖液
5ml
JJP61-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
JJP61-4
人IL-33標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
JJP61-5
人IL-33生物素化抗體
10ml
JJP61-6
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
JJP61-7
洗滌液(20X)
30ml
JJP61-8
TMB溶液
10ml
JJP61-9
終止液
5ml
JJP61-10
封板膜(透明)
2張
JJP61-11
封板膜(白色)
2張
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說(shuō)明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。