產(chǎn)品編號(hào)
JJJP6
Human IL-5 ELISA Kit
96次
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的Human IL-5 ELISA Kit (Human Interleukin-5 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白細(xì)胞介素5酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-5的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為12.8pg/ml，與人的GM-CSF、IL-3，小鼠IL-5等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
白細(xì)胞介素5 (Interleukin-5, IL-5)是一種分泌型糖蛋白，屬于α-螺旋細(xì)胞因子家族，該家族成員還包括IL-3和GM-CSF。與家族其它成員不同，IL-5以反向平行二聚體形式存在，單體間由兩個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵所形成的共價(jià)鍵相連。IL-5主要由CD4+Th2細(xì)胞產(chǎn)生，嗜酸性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞也能分泌少量IL-5。IL-5能夠增加嗜酸性粒細(xì)胞和CD34+祖細(xì)胞的產(chǎn)生和調(diào)動(dòng)，Th2細(xì)胞和肥大細(xì)胞產(chǎn)生的IL-5還能夠促進(jìn)骨髓外嗜酸性粒細(xì)胞祖細(xì)胞的成熟。人IL-5與小鼠IL-5具有70%的氨基酸同源性。
人IL-5受體由兩部分組成，一部分是特有的配體結(jié)合亞基IL-5?Rα，另一部是通用的信號(hào)傳導(dǎo)亞基βc，該亞基同時(shí)也是IL-13和GM-CSF的受體組成部分。兩種亞基都屬于細(xì)胞因子受體亞族成員。IL-5?Rα首先以低親和力與IL-5結(jié)合，隨后與βc二聚體結(jié)合形成高親和力受體。IL-5同樣能與蛋白聚糖結(jié)合，結(jié)合后能夠增加IL-5的生物活性。除了膜綁定的IL-5 Rα亞基外，還存在游離型的IL-5?Rα。游離IL-5?Rα亞基的mRNA主要存在于人CD34+臍帶細(xì)胞中，但是當(dāng)受到IL-5刺激以及在嗜酸性粒細(xì)胞分化時(shí)，跨膜形式的IL-5?Rα表型會(huì)增多。當(dāng)出現(xiàn)嗜酸性粒細(xì)胞增多癥時(shí)，兩種亞型的IL-5?Rα表達(dá)都會(huì)上調(diào)。用IL-5處理成熟的嗜酸性粒細(xì)胞會(huì)造成細(xì)胞表面IL-5 Rα表達(dá)下調(diào)，降低細(xì)胞對(duì)IL-5的響應(yīng)能力。在體外，游離IL-5?Rα表現(xiàn)出IL-5的拮抗作用。IL-5?Rα主要表達(dá)在嗜酸性粒細(xì)胞上，但在嗜堿性粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞表面也有少量表達(dá)。
在人體內(nèi)，IL-5主要作用于嗜酸性粒細(xì)胞，促進(jìn)其分化、成熟、活化、遷移和存活。但當(dāng)小鼠出現(xiàn)IL-5基因缺失時(shí)，體內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)量及活性僅表現(xiàn)為減少和降低，而并非完全消失，這可能是由于IL-3、GM-CSF和Eotaxin同樣能夠促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞的擴(kuò)增和遷移。在過敏性氣喘中，IL-5能夠促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞在肺部的浸潤(rùn)，加重病情，但當(dāng)給予IL-5抗體時(shí)，并未取得明顯的臨床療效。然而在嗜酸性粒細(xì)胞增多癥中，給予IL-5抗體后，體內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)減少了50%。另外，IL-5還能夠作為嗜堿性粒細(xì)胞的分化因子，協(xié)助組胺和白三烯分泌。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中人IL-5的濃度，其原理見圖1。人IL-5特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人IL-5會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人IL-5抗體后，生物素化抗人IL-5抗體與人IL-5結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會(huì)催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。人IL-5濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中人IL-5濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
JJJP6-1
人IL-5抗體預(yù)包被板
8孔×12條
JJJP6-2
樣品分析緩沖液
5ml
JJJP6-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
JJJP6-4
人IL-5標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
JJJP6-5
人IL-5生物素化抗體
10ml
JJJP6-6
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
JJJP6-7
洗滌液(20X)
30ml
JJJP6-8
TMB溶液
10ml
JJJP6-9
終止液
5ml
JJJP6-10
封板膜(透明)
2張
JJJP6-11
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。