產(chǎn)品編號(hào)
JJP60
Mouse IL-5 ELISA Kit
96次
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的Mouse IL-5 ELISA Kit (Mouse Interleukin-5 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠白細(xì)胞介素5酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-5的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為14.8pg/ml，與小鼠GM-CSF、IFN-γ、IL-1α、IL-1β、IL-1Rα、 IL-2、IL-3、IL-4，人IL-5等均沒(méi)有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
白細(xì)胞介素5 (Interleukin 5, IL-5)，又稱T細(xì)胞替換因子、B細(xì)胞生長(zhǎng)因子II、嗜酸性粒細(xì)胞分化因子或嗜酸性粒細(xì)胞集落刺激因子，是一種主要由T細(xì)胞產(chǎn)生的多效性細(xì)胞因子。IL-5能夠促進(jìn)小鼠B細(xì)胞增殖和分化，并促進(jìn)IgM、IgG1、IgA和IgE分泌。IL-5對(duì)成熟的嗜酸性粒細(xì)胞具有趨化作用，并且能夠增強(qiáng)嗜酸性粒細(xì)胞的存活能力及功能。另外，IL-5還能與多種集落刺激因子協(xié)同作用，增強(qiáng)嗜酸性粒細(xì)胞祖細(xì)胞的產(chǎn)生和嗜酸性粒細(xì)胞擴(kuò)增。由于IL-5對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞的多種作用效果，IL-5對(duì)哮喘和其他嗜酸性粒細(xì)胞增多型炎癥反應(yīng)都具有一定影響。
天然的小鼠IL-5是一種分子量在40-45kDa之間的糖蛋白，以二硫鍵相連的同型二聚體形式存在。小鼠IL-5的cDNA編碼產(chǎn)生133個(gè)氨基酸的前體蛋白，其中包括一個(gè)疏水信號(hào)肽和113個(gè)氨基酸的成熟IL-5肽段。成熟的人IL-5與小鼠IL-5具有70%的氨基酸同源性，小鼠IL-5和人IL-5對(duì)人源細(xì)胞系具有等同的生物活性。
小鼠IL-5的受體是由α亞基和β亞基組成的異質(zhì)二聚體。兩種亞基都是I型跨膜蛋白，屬于細(xì)胞因子受體亞族。α亞基能夠與IL-5特異性結(jié)合，β亞基又稱AIC2B，即βc亞基，同時(shí)也是IL-3、IL-5和GM-CSF高親和受體復(fù)合物的組成部分。β亞基并不能直接與IL-5結(jié)合，而是要與α亞基一起形成IL-5的高親和力受體。除了膜表面的α亞基外，還存在一種游離的IL-5 Rα亞基，純化后的游離IL-5 Rα亞基在功能上具體表現(xiàn)為IL-5的拮抗劑。小鼠IL-5 Rα亞基僅在嗜酸性粒細(xì)胞、B細(xì)胞和肥大細(xì)胞表面表達(dá)，而βc亞基則在多種造血細(xì)胞系中都有表達(dá)。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中小鼠IL-5的濃度，其原理見圖1。小鼠IL-5特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的小鼠IL-5會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗小鼠IL-5抗體后，生物素化抗小鼠IL-5抗體與小鼠IL-5結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。小鼠IL-5濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中小鼠IL-5濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
JJP60-1
小鼠IL-5抗體預(yù)包被板
8孔×12條
JJP60-2
樣品分析緩沖液
5ml
JJP60-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
JJP60-4
小鼠IL-5標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
JJP60-5
小鼠IL-5生物素化抗體
10ml
JJP60-6
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
JJP60-7
洗滌液(20X)
30ml
JJP60-8
TMB溶液
10ml
JJP60-9
終止液
5ml
JJP60-10
封板膜(透明)
2張
JJP60-11
封板膜(白色)
2張
–
說(shuō)明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)測(cè)試時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。