產(chǎn)品編號(hào)
JJJP6
Human IL-4 ELISA Kit (High-sensitive)
96次
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生產(chǎn)的Human IL-4ELISA Kit(Human Interleukin-4Enzyme-Linked ImmunoSorbent AssayKit, High-sensitive)，即高敏型人白細(xì)胞介素4酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-4的ELISA試劑盒，最小檢出量為4.3pg/ml。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為4.3pg/ml，與人IL-4sR、小鼠IL-4等沒有交叉反應(yīng)。板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
IL-4即白細(xì)胞介素-4 (簡(jiǎn)稱白介素4)，是一種多功能細(xì)胞因子，主要由活化的T淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞產(chǎn)生。 IL-4因?yàn)樘腔牟煌?，分子量?5-19kDa不等。在不同類型的細(xì)胞中，IL-4參與調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的免疫應(yīng)答功能。IL-4參與B細(xì)胞的激活過程，它能誘導(dǎo)處于靜息期的B細(xì)胞上II型MHC(主要組織相容復(fù)合體)分子的表達(dá)，增強(qiáng)IgE與IgG的表達(dá)和分泌，還能調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞上對(duì)IgE低親和FC受體的表達(dá)。IL-4也是前體輔助T細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化的重要調(diào)節(jié)因子。此外，IL-4在體內(nèi)外均表現(xiàn)出了一定的抗腫瘤活性，IL-4在機(jī)體中的遺傳變異可導(dǎo)致缺血性中風(fēng)，腦血管意外或腦梗塞等疾病。
人IL-4前體蛋白(包含153個(gè)氨基酸)剪切掉24個(gè)氨基酸的信號(hào)肽后得到成熟的人IL-4。成熟的人IL-4與小鼠IL-4具有50%的氨基酸同源性，兩個(gè)物種的IL-4不存在交叉反應(yīng)性。同時(shí)人IL-4與人IL-13具有大約30%的氨基酸同源性，并且具有部分重疊的生物學(xué)活性。
特定細(xì)胞表面的受體復(fù)合物參與調(diào)節(jié)IL-4生物學(xué)功能。IL-4的受體主要有兩種類型，第一種類型的IL-4功能受體復(fù)合物由IL-4結(jié)合亞基(IL-4 R)和特定的γc鏈組成，該γc鏈同時(shí)也是IL-2、IL-7、IL-9和IL-15受體復(fù)合物的組成部分。第二種類型的IL-4功能受體復(fù)合物是由IL-4 R和IL-13 Rα組成，盡管IL-4 R并不直接與IL-13結(jié)合，但當(dāng)其與IL-13 Rα形成復(fù)合物后，該復(fù)合物同時(shí)也對(duì)IL-13具有很高的親和力。此外，除了細(xì)胞膜表面的IL-4受體，在人及小鼠的體液和小鼠細(xì)胞培養(yǎng)上清液中均檢測(cè)到了游離IL-4受體的存在。
IL-4先與IL-4 Rα結(jié)合形成IL-4/IL-4 Rα復(fù)合物，該復(fù)合物隨后再與輔助受體鏈γc或IL-13 R結(jié)合。當(dāng)IL-4與受體結(jié)合后，依靠胰島素受體底物IRS2和Shc蛋白激活Ras/MEK/Erk通路，實(shí)現(xiàn)促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂的作用。此外，IL-4與IL-4 Rα的結(jié)合還能夠誘導(dǎo)JAK及STAT的磷酸化，磷酸化后的STAT形成二聚體進(jìn)入細(xì)胞核，對(duì)靶基因的表達(dá)進(jìn)行調(diào)控，同時(shí)磷酸化后的JAK還能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)PL3K/AKT通路的激活。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中人IL-4的濃度，其原理見圖1。人IL-4特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人IL-4會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人IL-4抗體后，生物素化抗人IL-4抗體與人IL-4結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會(huì)催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。人IL-4濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
JJJP6-1
人IL-4抗體預(yù)包被板
8孔×12條
JJJP6-2
樣本分析緩沖液
5ml
JJJP6-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
JJJP6-4
人IL-4標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
JJJP6-5
人IL-4生物素化抗體
10ml
JJJP6-6
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
JJJP6-7
洗滌液(20X)
30ml
JJJP6-8
TMB溶液
10ml
JJJP6-9
終止液
5ml
JJJP6-10
封板膜(透明)
2張
JJJP6-11
封板膜(白色)
2張
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說明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。