產品編號
JP0045
Human BMP-2 ELISA Kit
96次
3198
的Human BMP-2 ELISA Kit (Human Bone Morphogenetic Protein 2 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人骨形成蛋白2酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的BMP-2的ELISA試劑盒。
本產品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結果表明，最小檢出量為38pg/ml，與人BMP-2/BMP-7 Heterodimer、BMP-5、BMP-6、BMP-7、BMPR-IB、LAP、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3等均沒有交叉反應，板內、板間變異系數(shù)均小于10%。
骨形成蛋白2 (Bone Morphogenetic Protein 2, BMP-2)是TGF-β大家族中的一員。BMPs最初被認為是軟骨和骨形成過程的蛋白調節(jié)因子，現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)他們還能夠參與多種組織和器官的胚胎形成和形態(tài)發(fā)生，還可以調節(jié)間葉細胞、上皮細胞、造血細胞和神經元細胞的生長、分化和凋亡。BMP-2具有多種功能，包括器官生成、骨形成和再生以及調節(jié)肢芽細胞發(fā)育。在胚胎發(fā)育過程中BMP-2也扮演重要角色。胚胎發(fā)育時，軟骨和骨分化形成的一系列過程都受到BMP-2的影響。如果將小鼠BMP-2基因敲除還會導致胚胎死亡。
每一種BMP都是先合成前體蛋白，再經由加工得到成熟BMP，隨后以二聚體的形式分泌出來。盡管同源二聚體是較為常見的形式，但也存在天然的異質二聚體，并且與同源二聚體具有相同的生物學活性。BMP-2是一種396個氨基酸的糖基化多肽，由19個氨基酸信號肽、263個氨基酸前導肽和114個氨基酸的成熟片段組成。成熟的BMP-2具有7個半胱氨酸殘基和一個N連接糖基化位點，BMP-2預測分子質量為14kDa，但由于糖基化的發(fā)生，實際分子量能夠達到18kDa。成熟的人、小鼠及大鼠BMP-2具有完全一致的氨基酸序列，BMP-2和BMP-4在氨基酸序列上具有92%的氨基酸同源性。
BMPs通過不同的異源低聚受體復合物實現(xiàn)信號傳遞。BMP-2受體包括I型受體：ALK-6/BMPR-IB、ALK-2/Act?RI和ALK-3/BMPR-IA，以及II型受體BMP?RII和Act?RIIB。內皮素能夠通過與I型受體中ALK-6/BMPR-IB?和ALK-3/BMPR-IA作用從而與BMP-2結合。BMP與受體結合后將通過Smad蛋白將信號直接傳遞至細胞核內。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中人BMP-2的濃度，其原理見圖1。人BMP-2特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的人BMP-2會與捕獲抗體結合。當加入生物素化的抗人BMP-2抗體后，生物素化抗人BMP-2抗體與人BMP-2結合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。人BMP-2濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中人BMP-2濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產品編號
產品名稱
包裝
JP0045-1
人BMP-2抗體預包被板
8孔×12條
JP0045-2
樣品分析緩沖液
5ml
JP0045-3
標準品稀釋液
10ml
JP0045-4
人BMP-2標準品
2-4瓶
JP0045-5
人BMP-2生物素化抗體
10ml
JP0045-6
辣根過氧化物酶標記Streptavidin
10ml
JP0045-7
洗滌液(20X)
30ml
JP0045-8
TMB溶液
10ml
JP0045-9
終止液
5ml
JP0045-10
封板膜(透明)
2張
JP0045-11
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
標準品4℃保存，1-2周內有效，-20℃保存6個月內有效；試劑盒其它組分4℃保存6個月內有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結晶，如果發(fā)現(xiàn)有結晶，請室溫水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的充分混勻對保證反應結果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產生。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。