Flag&Myc Co-IP陽性對照質粒對

發(fā)表于由

產品編號

JP07041S
Flag&Myc Co-IP陽性對照質粒對
各1μg

1776

JP07041M
Flag&Myc Co-IP陽性對照質粒對
各100μg

2338

自行研發(fā)生產的Flag&Myc Co-IP陽性對照質粒對(Positive Control Plasmids Pair for Flag&Myc Co-IP)包含pCMV-3X Flag-JP5和pCMV-Myc-LTA兩種質粒，可以用于在哺乳動物細胞中表達N端帶有3X Flag標簽的人源JP5和Myc標簽的LTA (large T antigen)融合蛋白。因為JP5和LTA蛋白間具有較強的相互作用，本質粒對可作為共轉染細胞免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP)的陽性對照使用，也可以單獨轉染細胞作為免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)的陽性對照使用。
免疫沉淀或免疫共沉淀是研究蛋白或蛋白與蛋白相互作用(Protein-Protein Interactions, PPIs)的常用實驗技術，通過使用特異性抗體和可結合抗體的介質(如Protein A/G Agarose或Protein A/G磁珠)，或直接使用偶聯(lián)特異性抗體的介質(如瓊脂糖凝膠或磁珠)，然后通過離心或磁力從溶液中分離出抗原和抗體復合物，從而將目標蛋白質從復雜樣品中分離出來，隨后可以用于Western印跡檢測或質譜分析等[1-2]。
pCMV-3X Flag-JP5質粒表達JP5。JP5中文名為細胞腫瘤抗原JP5 (Cellular tumor antigen JP5)，全長393氨基酸，理論分子量為43.7kDa，實際分子量約為53kDa，是調控細胞周期的重要轉錄因子，主要功能包括調節(jié)細胞周期、促進細胞凋亡、維持基因組穩(wěn)定性和抑制腫瘤血管生成等，野生型的JP5是一個重要的抑癌基因[3]。
pCMV-Myc-LTA質粒表達LTA。LTA即SV40大T抗原(SV40 large T antigen)，也稱SV40gp6 large T antigen (Macaca mulatta polyomavirus 1)，全長708氨基酸，分子量為81.6kDa，是一種六聚體蛋白。當LTA單獨表達時能誘導靜止細胞的增殖和轉化，可以誘導實驗動物腫瘤的形成，為研究DNA復制和細胞轉化提供了非常有用的模型[4]。
本質粒對均含有CMV啟動子，可以高效啟動目的蛋白在細胞中的表達，均帶有氨芐青霉素(Ampicillin)抗性和新霉素(Neomycin)抗性。
本質粒對用于磁珠法免疫共沉淀的效果參考圖1A，用于瓊脂糖凝膠法免疫共沉淀的效果參考圖1B。

圖1. 的Flag&Myc Co-IP陽性對照質粒對(JP07041)用于免疫共沉淀的效果圖。圖A使用了Flag標簽蛋白免疫沉淀試劑盒(磁珠法) (JP2081)和Myc標簽蛋白免疫沉淀試劑盒(磁珠法) (JP2083)，圖B使用了Flag標簽蛋白免疫沉淀試劑盒(瓊脂糖凝膠法) (JP2002)和Myc標簽蛋白免疫沉淀試劑盒(瓊脂糖凝膠法) (JP2004)。293T細胞(人胚腎細胞)單獨或共轉染pCMV-3X Flag-JP5和pCMV-Myc-LTA質粒36小時后，使用Western及IP細胞裂解液(JP010013)裂解，并使用相應的標簽蛋白免疫沉淀試劑盒進行免疫沉淀。泳道1為小鼠IgG磁珠或瓊脂糖凝膠免疫沉淀后洗脫的樣品，為免疫共沉淀的陰性對照；泳道2、3和4為磁珠或瓊脂糖凝膠免疫沉淀后洗脫的樣品，其中圖A是經3X Flag Peptide或c-Myc Peptide洗脫后的樣品，圖B是經SDS-PAGE Sample Loading Buffer洗脫后的樣品，從泳道4可觀察到共轉染的Flag-JP5與Myc-LTA可以相互作用。Input即全細胞裂解液(Total cell lysate)。Western印跡成像由BeyoImager? 600化學發(fā)光成像系統(tǒng)完成(EI600)。實際結果會因實驗條件、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中數(shù)據僅供參考。
推薦使用的測序引物序列如下：
CMV-F primer: 5′ -CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3′
BGH-R primer: 5′-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3′
pCMV-3X Flag-JP5和pCMV-Myc-LTA的全序列信息:JP07041-1 pCMV-3X Flag-JP5-全長序列.txt；JP07041-2 pCMV-Myc-LTA-全序列.txt。
包裝清單：

產品編號
產品名稱
包裝

JP07041S-1
pCMV-3X Flag-JP5
1μg

JP07041S-2
pCMV-Myc-LTA
1μg

—
說明書
1份

產品編號
產品名稱
包裝

JP07041M-1
pCMV-3X Flag-JP5
100μg

JP07041M-2
pCMV-Myc-LTA
100μg

—
說明書
1份

保存條件：
-20℃保存。
注意事項：
本質粒未經書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。
本質粒對僅經過測序、免疫沉淀和免疫共沉淀驗證，未經過功能性驗證。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。