產(chǎn)品編號(hào)
JJJP7
Human MSP ELISA Kit
96次
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的Human MSP ELISA Kit (Human Macrophage Stimulating Protein Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人巨噬細(xì)胞刺激蛋白酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的MSP的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為96pg/ml，與人的HGF、MSP-a、MSP-β、小鼠MSP等均沒(méi)有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
巨噬細(xì)胞刺激蛋白(Macrophage Stimulating Protein, MSP)，又稱(chēng)為肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子樣蛋白(HGF-like Protein)，屬于生長(zhǎng)因子HGF家族。MSP包含一個(gè)PAN/APPLE樣區(qū)域、四個(gè)三環(huán)結(jié)構(gòu)域和一個(gè)不具有酶活性的蛋白酶S1域。人MSP與小鼠MSP具有79%的氨基酸同源性。MSP主要由肝細(xì)胞以無(wú)活性的前體蛋白形式分泌，在組織受損時(shí)，游離的pro-MSP經(jīng)酶切作用得到具有生物活性的異質(zhì)二聚體，該二聚體包含分子量在45-62kDa的α鏈和分子量在25-35kDa的β鏈，二者之間由二硫鍵連接。在急性腎衰竭以及類(lèi)肉瘤狀和支氣管擴(kuò)張患者中，血清MSP水平會(huì)出現(xiàn)升高。
MSP或單獨(dú)的β鏈都能以較高的親和力與酪氨酸激酶受體MSP R/Ron結(jié)合，但只有MSP能夠引發(fā)信號(hào)傳遞。MSP R主要表達(dá)在巨噬細(xì)胞以及皮膚、肺、消化道和女性生殖系統(tǒng)上皮細(xì)胞中。分泌型MSP R同樣也能夠與MSP結(jié)合，但會(huì)抑制MSP R依賴(lài)的信號(hào)傳遞。在多種腫瘤中，MSP R表達(dá)會(huì)出現(xiàn)上調(diào)，MSP R的激活也會(huì)有利于腫瘤的轉(zhuǎn)移。
MSP對(duì)巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)具有兩方面的影響。MSP能夠增強(qiáng)巨噬細(xì)胞遷移、呼吸爆發(fā)和對(duì)細(xì)菌感染物的吞噬作用。反之，MSP也能抑制在IPS或IFN誘導(dǎo)下巨噬細(xì)胞和類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞炎癥調(diào)節(jié)因子的產(chǎn)生。MSP能夠促進(jìn)角質(zhì)細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞和腎小球系膜細(xì)胞的增殖，增強(qiáng)破骨細(xì)胞介導(dǎo)的骨重吸收。MSP能夠抑制早期髓系造血祖細(xì)胞的分化和增殖。MSP還能作為一種神經(jīng)元營(yíng)養(yǎng)因子，促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞存活和神經(jīng)突觸延伸。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測(cè)樣品中人MSP的濃度，其原理見(jiàn)圖1。人MSP特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人MSP會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人MSP抗體后，生物素化抗人MSP抗體與人MSP結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。人MSP濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中人MSP濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱(chēng)
包裝
JJJP7-1
人MSP抗體預(yù)包被板
8孔×12條
JJJP7-2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(5X)
20ml
JJJP7-3
人MSP標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
JJJP7-4
人MSP生物素化抗體
10ml
JJJP7-5
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
JJJP7-6
洗滌液(20X)
30ml
JJJP7-7
TMB溶液
10ml
JJJP7-8
終止液
5ml
JJJP7-9
封板膜(透明)
2張
JJJP7-10
封板膜(白色)
2張
–
說(shuō)明書(shū)
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱(chēng)的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。