產品編號
PC215
Mouse Cys-C ELISA Kit
96次
3198
的Mouse Cys-C ELISA Kit (Mouse Cystatin C Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠胱氨酸蛋白酶抑制劑C酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的Cys-C的ELISA試劑盒。
本產品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結果表明，最小檢出量為12.8pg/ml，與小鼠E-Selectin、ICAM-1
、L-Selectin、P-Selectin及人Cys-C等均沒有交叉反應，板內、板間變異系數(shù)均小于10%。
半胱氨酸蛋白酶抑制劑C (Cystatin C, Cys-C)，又稱胱抑素C，是一種由CJJP30基因編碼產生的分泌型半胱氨酸蛋白酶抑制劑，屬于半胱氨酸蛋白酶抑制劑家族。其含有120個氨基酸殘基，分子量在13kDa左右，以非糖基化的形式存在，在大鼠體內存在有糖基化的Cys-C。成熟的小鼠和大鼠Cys-C之間具有88%的氨基酸同源性，與人Cys-C具有72%的氨基酸同源性。Cys-C容易在內切蛋白酶的作用下得到N端縮短的Cys-C形式。木瓜蛋白酶家族中的半胱氨酸蛋白酶例如組織蛋白酶B、H、K、L及S都會受到Cys-C的影響。
多種組織均能產生Cys-C，在血漿、尿液及腦脊液等多種體液樣本中都可以檢測到Cys-C。Cys-C能夠輕松被腎小球濾過，隨后被近端小管表皮細胞通過巨蛋白介導的內吞作用所吸收代謝，因而無法重新回到血液中。因此血清中Cys-C的濃度與腎小球濾過率密切相關。其在血清或血漿中的濃度被認為是評估藥物腎毒性的指標之一，并且與肌酸酐相比，Cys-C受性別、年齡、體重及肝硬化影響較小。但是在慢性炎癥期間Cys-C的濃度會有所增加，這一部分是由于IL-6增加Cys-C產生有關。相反，一些抗炎性細胞因子如IL-10、IFN-β和IFN-γ則會減少Cys-C的表達，降低其濃度。
Cys-C通過調節(jié)半胱氨酸蛋白酶的活性影響部分疾病發(fā)展。在人體內，腎功能正常狀態(tài)下Cys-C濃度過高通常與冠狀動脈和心血管疾病相關。游離的Cys-C對腫瘤的轉移具有一定影響，異常的Cys-C水平過低，會導致組織蛋白酶B介導的細胞外基質降解增加，從而促進腫瘤轉移，Cys-C濃度升高時則會表現(xiàn)出對TGF-β的拮抗作用，減慢腫瘤的侵襲和生長。在小鼠阿爾茲海默病模型中，Cys-C還能夠抑制β-淀粉蛋白沉積，保護小鼠神經元細胞免受損害。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測樣品中小鼠Cys-C的濃度，其原理見圖1。小鼠Cys-C特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的小鼠Cys-C會與捕獲抗體結合。當加入生物素化的抗小鼠Cys-C抗體后，生物素化抗小鼠Cys-C抗體與小鼠Cys-C結合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。小鼠Cys-C濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中小鼠Cys-C濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產品編號
產品名稱
包裝
PC215-1
小鼠Cys-C抗體預包被板
8孔×12條
PC215-2
標準品稀釋液(5X)
10ml
PC215-3
小鼠Cys-C標準品
2-4瓶
PC215-4
小鼠Cys-C生物素化抗體
10ml
PC215-5
辣根過氧化物酶標記Streptavidin
10ml
PC215-6
洗滌液(20X)
30ml
PC215-7
TMB溶液
10ml
PC215-8
終止液
5ml
PC215-9
封板膜(透明)
2張
PC215-10
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
標準品4oC保存，1-2周內有效，-20oC保存6個月內有效；試劑盒其它組份4oC保存6個月內有效。除標準品外，試劑盒其它組份嚴禁凍存。
注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結晶，如果發(fā)現(xiàn)有結晶，請室溫水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻對保證反應結果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產生。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。