Human Dtk/Tyro3/SKY ELISA Kit

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產(chǎn)品編號(hào)

PD235
Human Dtk/Tyro3/SKY ELISA Kit
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的Human Dtk/Tyro3/SKY ELISA Kit (Human Dtk/Tyro3/SKY Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人受體酪氨酸激酶酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的Dtk/Tyro3/SKY的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為64pg/ml，與人的Axl/Fc Chimera，mer/Fc Chimera及小鼠的Dtk/Tyro3/SKY/Fc Chimera沒(méi)有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
受體酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase, RTKs)為一類(lèi)細(xì)胞表面跨膜蛋白，在介導(dǎo)細(xì)胞外信號(hào)向胞內(nèi)傳導(dǎo)過(guò)程中及重要作用。目前已發(fā)現(xiàn)約60種RTKs，按照受體與配體特征將其分為20個(gè)亞家族。Dtk，也稱Tyro3和SKY，是AXL酪氨酸受體激酶的三個(gè)組成成分中的一個(gè)，另外兩個(gè)成分是mer和AXL，它們具有共同的配體：Gas6和Protein S。Dtk分子由胞外區(qū)、胞內(nèi)區(qū)和跨膜區(qū)三部分組成，為單次跨膜蛋白，其特點(diǎn)是胞外區(qū)由兩個(gè)免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域和兩個(gè)纖連蛋白III型結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，這種特點(diǎn)也是神經(jīng)細(xì)胞黏附分子和酪氨酸激酶的特點(diǎn)之一。Dtk分子在人和動(dòng)物的多種組織中廣泛表達(dá)，在調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和分化的過(guò)程中起重要作用。Dtk通過(guò)與依賴維生素K的Gas6基因的蛋白產(chǎn)物結(jié)合而與抗凝血作用的Protein S作用，從而引起下游信號(hào)的激活，促進(jìn)細(xì)胞增殖，生長(zhǎng)，防止調(diào)亡。胚胎發(fā)育時(shí)期，Dtk表達(dá)廣泛，對(duì)成人來(lái)說(shuō)，Dtk則主要在大腦的部分區(qū)域集中表達(dá)。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中人Dtk/Tyro3/SKY的濃度，其原理見(jiàn)圖1。人Dtk/Tyro3/SKY特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人Dtk/Tyro3/SKY會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人Dtk/Tyro3/SKY抗體后，生物素化抗人Dtk/Tyro3/SKY抗體與人Dtk/Tyro3/SKY結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。人Dtk/Tyro3/SKY濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。

圖1.雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：

產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝

PD235-1
人Dtk/Tyro3/SKY抗體預(yù)包被板
8孔×12條

PD235-2
樣本分析緩沖液
5ml

PD235-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(5X)
10ml

PD235-4
人Dtk/Tyro3/SKY標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶

PD235-5
人Dtk/Tyro3/SKY生物素化抗體
10ml

PD235-6
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml

PD235-7
洗滌液(20X)
30ml

PD235-8
TMB溶液
10ml

PD235-9
終止液
5ml

PD235-10
封板膜(透明)
2張

PD235-11
封板膜(白色)
2張

—
說(shuō)明書(shū)
1份

保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。