產(chǎn)品編號(hào)
PE228
Mouse EPO ELISA Kit
96次
2925
的Mouse EPO ELISA Kit (Mouse Erythropoietin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠促紅細(xì)胞生成素酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的EPO的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為58pg/ml，與小鼠TPO沒(méi)有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
促紅細(xì)胞生成素(Erythropoietin, EPO)是一種由腎臟產(chǎn)生的糖蛋白，參與調(diào)節(jié)哺乳類動(dòng)物中紅細(xì)胞生成。EPO的產(chǎn)生受到氧利用率變化的調(diào)節(jié)，在缺氧條件下，EPO水平會(huì)有所上升，從而導(dǎo)致紅細(xì)胞數(shù)量增加。小鼠EPO基因編碼192個(gè)氨基酸殘基前體，包含26個(gè)氨基酸信號(hào)肽和166個(gè)氨基酸的成熟蛋白，其中有三個(gè)潛在的N-糖基化位點(diǎn)，小鼠EPO缺乏在人類EPO中發(fā)現(xiàn)的O-糖基化位點(diǎn)。糖基化對(duì)穩(wěn)定EPO的體內(nèi)活性具有重要作用[1]，若缺乏糖鏈，EPO在體內(nèi)會(huì)被迅速水解而失活，但體外受體結(jié)合不需要糖鏈。根據(jù)細(xì)胞來(lái)源的不同產(chǎn)生不同亞型的EPO，不同亞型的EPO的糖類組成和唾液酸含量不同。成熟的小鼠EPO與成熟的大鼠、人和貓科動(dòng)物EPO序列分別有94%、80%和82%的同源性。EPO通過(guò)兩個(gè)EPO受體(EPO receptor, EPO R)亞單位組成的高親和力的同源二聚體EPO R結(jié)合并發(fā)出信號(hào)。EPO R亞單位屬于I型細(xì)胞因子受體超家族的I型跨膜糖蛋白，EPO與EPO R同源二聚體的結(jié)合導(dǎo)致非受體型酪氨酸蛋白激酶JAK2的構(gòu)象變化、磷酸化和激活，從而使下游信號(hào)激活[2]。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中小鼠EPO的濃度，其原理見(jiàn)圖1。小鼠EPO特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的小鼠EPO會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗小鼠EPO抗體后，生物素化抗小鼠EPO抗體與小鼠EPO結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。小鼠EPO濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
PE228-1
小鼠EPO抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PE228-2
樣品分析緩沖液
5ml
PE228-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
PE228-4
小鼠EPO標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PE228-5
小鼠EPO生物素化抗體
10ml
PE228-6
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PE228-7
洗滌液(20X)
30ml
PE228-8
TMB溶液
10ml
PE228-9
終止液
5ml
PE228-10
封板膜(透明)
2張
PE228-11
封板膜(白色)
2張
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說(shuō)明書(shū)
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。