產(chǎn)品編號(hào)
PC215
Mouse Cys-C ELISA Kit
96次
3198
的Mouse Cys-C ELISA Kit (Mouse Cystatin C Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠胱氨酸蛋白酶抑制劑C酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的Cys-C的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為12.8pg/ml，與小鼠E-Selectin、ICAM-1
、L-Selectin、P-Selectin及人Cys-C等均沒(méi)有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
半胱氨酸蛋白酶抑制劑C (Cystatin C, Cys-C)，又稱胱抑素C，是一種由CJJP30基因編碼產(chǎn)生的分泌型半胱氨酸蛋白酶抑制劑，屬于半胱氨酸蛋白酶抑制劑家族。其含有120個(gè)氨基酸殘基，分子量在13kDa左右，以非糖基化的形式存在，在大鼠體內(nèi)存在有糖基化的Cys-C。成熟的小鼠和大鼠Cys-C之間具有88%的氨基酸同源性，與人Cys-C具有72%的氨基酸同源性。Cys-C容易在內(nèi)切蛋白酶的作用下得到N端縮短的Cys-C形式。木瓜蛋白酶家族中的半胱氨酸蛋白酶例如組織蛋白酶B、H、K、L及S都會(huì)受到Cys-C的影響。
多種組織均能產(chǎn)生Cys-C，在血漿、尿液及腦脊液等多種體液樣本中都可以檢測(cè)到Cys-C。Cys-C能夠輕松被腎小球?yàn)V過(guò)，隨后被近端小管表皮細(xì)胞通過(guò)巨蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用所吸收代謝，因而無(wú)法重新回到血液中。因此血清中Cys-C的濃度與腎小球?yàn)V過(guò)率密切相關(guān)。其在血清或血漿中的濃度被認(rèn)為是評(píng)估藥物腎毒性的指標(biāo)之一，并且與肌酸酐相比，Cys-C受性別、年齡、體重及肝硬化影響較小。但是在慢性炎癥期間Cys-C的濃度會(huì)有所增加，這一部分是由于IL-6增加Cys-C產(chǎn)生有關(guān)。相反，一些抗炎性細(xì)胞因子如IL-10、IFN-β和IFN-γ則會(huì)減少Cys-C的表達(dá)，降低其濃度。
Cys-C通過(guò)調(diào)節(jié)半胱氨酸蛋白酶的活性影響部分疾病發(fā)展。在人體內(nèi)，腎功能正常狀態(tài)下Cys-C濃度過(guò)高通常與冠狀動(dòng)脈和心血管疾病相關(guān)。游離的Cys-C對(duì)腫瘤的轉(zhuǎn)移具有一定影響，異常的Cys-C水平過(guò)低，會(huì)導(dǎo)致組織蛋白酶B介導(dǎo)的細(xì)胞外基質(zhì)降解增加，從而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移，Cys-C濃度升高時(shí)則會(huì)表現(xiàn)出對(duì)TGF-β的拮抗作用，減慢腫瘤的侵襲和生長(zhǎng)。在小鼠阿爾茲海默病模型中，Cys-C還能夠抑制β-淀粉蛋白沉積，保護(hù)小鼠神經(jīng)元細(xì)胞免受損害。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測(cè)樣品中小鼠Cys-C的濃度，其原理見(jiàn)圖1。小鼠Cys-C特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的小鼠Cys-C會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗小鼠Cys-C抗體后，生物素化抗小鼠Cys-C抗體與小鼠Cys-C結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。小鼠Cys-C濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中小鼠Cys-C濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
PC215-1
小鼠Cys-C抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PC215-2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(5X)
10ml
PC215-3
小鼠Cys-C標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PC215-4
小鼠Cys-C生物素化抗體
10ml
PC215-5
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PC215-6
洗滌液(20X)
30ml
PC215-7
TMB溶液
10ml
PC215-8
終止液
5ml
PC215-9
封板膜(透明)
2張
PC215-10
封板膜(白色)
2張
–
說(shuō)明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4oC保存，1-2周內(nèi)有效，-20oC保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組份4oC保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組份嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。