產(chǎn)品編號
JJP55
Human IL-1α ELISA Kit
96次
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的Human IL-1α ELISA Kit (Human Interleukin-1α Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白細(xì)胞介素1α酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-1α的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為8.4pg/ml，與人IFN-γ、IGF-I、IGF-II、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
白細(xì)胞介素-1?(Interleukine-1, IL-1)，包括兩種蛋白IL-1α和IL-1β，二者由不同基因編碼產(chǎn)生但都能夠作用于相同的細(xì)胞表面受體。除了皮膚角質(zhì)細(xì)胞、部分表皮細(xì)胞和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的某些特定細(xì)胞外，健康人體內(nèi)的其它細(xì)胞均不產(chǎn)生IL-1。絕大多數(shù)細(xì)胞在受到某些炎性試劑和細(xì)菌內(nèi)毒素刺激或在發(fā)生感染時才能合成和分泌IL-1。?
IL-1α和IL-1β在結(jié)構(gòu)上具有一定的相似性，氨基酸水平上也具有25%的同源性。二者都是先合成分子量為31kDa的前體蛋白，隨后在酶切作用下得到17.5kDa的成熟蛋白分子。IL-1α和IL-1β都不含有疏水性的信號肽，二者都以非經(jīng)典途徑被分泌出來。大多數(shù)IL-1α都以前體蛋白的形式保留在細(xì)胞內(nèi)，其中一部分未被加工的IL-1α?xí)贿\(yùn)送至細(xì)胞表面，這些膜綁定的未經(jīng)加工的IL-1α也具有一定的生物活性，能夠以旁分泌的形式作用于鄰近細(xì)胞表面的IL-1受體。在大多數(shù)情況下，IL-1α和IL-1β以同樣的親和力結(jié)合于相同的細(xì)胞表面受體，發(fā)揮相同的生物學(xué)作用。IL-1有兩種跨膜受體蛋白，一種是分子量約為80kDa的IL-1 RI (IL-1 receptor, type I)，其主要表達(dá)在T細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、滑膜細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及肝細(xì)胞中；另一種是分子量約為68kDa的IL-1 RII (IL-1 receptor, type II)，其主要表達(dá)在B細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞及骨髓細(xì)胞中。
IL-1具有廣泛的生物學(xué)作用，在肝臟中，IL-1能夠啟動急性時相反應(yīng)，從而增加肝臟蛋白合成，減少白蛋白產(chǎn)生。IL-1還能誘導(dǎo)滑膜細(xì)胞產(chǎn)生膠原蛋白酶，促進(jìn)骨骼中鈣吸收。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，IL-1參與發(fā)燒和慢波睡眠過程，能夠誘導(dǎo)促腎上腺皮質(zhì)激素釋放。IL-1還參與調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)，小劑量時，IL-1能夠促進(jìn)胰島素產(chǎn)生，劑量過高則對胰島B細(xì)胞具有細(xì)胞毒作用。在免疫系統(tǒng)中，IL-1也具有一定作用，它能作用于巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、NK細(xì)胞和LAK細(xì)胞。在其他細(xì)胞因子的協(xié)同作用下，IL-1能夠通過作用于NK細(xì)胞和LAK細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤的活性。
IL-1主要激活NF-κB信號通路調(diào)控炎癥因子的表達(dá)。IL-1和其受體結(jié)合后，激活下游一系列蛋白如JNK、p38、ERK1/2，及NF-κB和c-Jun。IL-1的信號通路見圖1。
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圖1. IL-1的信號通路示意圖。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中人IL-1α的濃度，其原理見圖2。人IL-1α特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的人IL-1α?xí)c捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人IL-1α抗體后，生物素化抗人IL-1α抗體與人IL-1α結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測。人IL-1α濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中人IL-1α濃度。
圖2. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
JJP55-1
人IL-1α抗體預(yù)包被板
8孔×12條
JJP55-2
樣品分析緩沖液
5ml
JJP55-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
JJP55-4
人IL-1α標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
JJP55-5
人IL-1α生物素化抗體
10ml
JJP55-6
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
JJP55-7
洗滌液(20X)
30ml
JJP55-8
TMB溶液
10ml
JJP55-9
終止液
5ml
JJP55-10
封板膜(透明)
2張
JJP55-11
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨(dú)立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。