Human IL-18/IL-1F4 ELISA Kit

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產(chǎn)品編號(hào)

JJJP5
Human IL-18/IL-1F4 ELISA Kit
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的Human IL-18 ELISA Kit (Human Interleukin-1β Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白細(xì)胞介素18酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿、或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-18的ELISA試劑盒。

本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為15.8pg/ml，與人IFN-γ、IL-18 BPa、IL-18 Rα、小鼠IL-18、大鼠IL-18等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
白細(xì)胞介素18 (Interleukin-18, IL-18)，又稱IL-1F4，是一種屬于IL-1家族的促炎性細(xì)胞因子，在不同環(huán)境中會(huì)表現(xiàn)出不同的免疫效應(yīng)。IL-18主要以分子量為24kDa的前體蛋白形式表達(dá)，產(chǎn)生IL-18的細(xì)胞主要有內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、γδT細(xì)胞和吞噬細(xì)胞。前體IL-18在細(xì)胞內(nèi)通過Caspase-1調(diào)節(jié)的蛋白水解作用被激活，隨后分泌出分子量為17kDa的成熟IL-18。壞死細(xì)胞也能分泌出前體IL-18，在細(xì)胞外經(jīng)由多種蛋白酶處理后得到成熟的IL-18分子。IL-18的激活主要發(fā)生在感染或組織損傷時(shí)，并且會(huì)促進(jìn)慢性炎癥的病理損傷。
IL-18有兩種受體，IL-18 Rα和IL-18 Rβ。IL-18首先與IL-18 Rα結(jié)合，隨后招募IL-18 Rβ形成信號(hào)傳遞受體復(fù)合物。當(dāng)IL-18與IL-18結(jié)合蛋白結(jié)合時(shí)，會(huì)表現(xiàn)出相反的生物學(xué)活性。當(dāng)IL-12或IL-15同時(shí)存在時(shí)，IL-18能夠促進(jìn)IFN-γ的產(chǎn)生，誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞溶解活性，從而增強(qiáng)抗病毒免疫應(yīng)答。然而在IL-12或IL-15不存在時(shí)，IL-18則會(huì)促進(jìn)Th2型細(xì)胞因子IL-4和IL-13的產(chǎn)生。當(dāng)與IL-1β或IL-23共存時(shí)，IL-18會(huì)誘導(dǎo)非抗原依賴性的IL-17的產(chǎn)生。同時(shí)IL-18還能促進(jìn)骨髓來源樹突狀細(xì)胞的成熟，誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)。在腫瘤中，IL-18具有多種生物學(xué)活性，包括增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)、抑制或促進(jìn)新生血管生成以及促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。成熟的人IL-18與小鼠和大鼠IL-18具有63%的氨基酸同源性。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中人IL-18的濃度，其原理見圖1。人IL-18特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人IL-18會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人IL-18抗體后，生物素化抗人IL-18抗體與人IL-18結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會(huì)催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測。人IL-18濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中人IL-18濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝

JJJP5-1

人IL-18/IL-1F4抗體預(yù)包被板

8孔×12條

JJJP5-2

樣品分析緩沖液

5ml

JJJP5-3

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10ml

JJJP5-4

人IL-18/IL-1F4標(biāo)準(zhǔn)品

2-4瓶

JJJP5-5

人IL-18/IL-1F4生物素化抗體

10ml

JJJP5-6

辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin

10ml

JJJP5-7

洗滌液(20X)

30ml

JJJP5-8

TMB溶液

10ml

JJJP5-9

終止液

5ml

JJJP5-10

封板膜(透明)

2張

JJJP5-11

封板膜(白色)

2張

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說明書

1份

保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測試，所以請勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測時(shí)，請獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28oC。溫度低于25oC會(huì)導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。