產(chǎn)品編號(hào)
JJJP50
Human IL-17 ELISA Kit
96次
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的Human IL-17 ELISA Kit (Human Interleukin-17 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白細(xì)胞介素17酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-17的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為11.3pg/ml，與人IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-16、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17F、小鼠IL-17等均沒(méi)有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
人白細(xì)胞介素17(Interleukin 17, IL-17)，又稱IL-17A或CTLA-8，是一種分子量在21kDa的糖基化多肽，屬于IL-17細(xì)胞因子家族。成熟的人IL-17是由158個(gè)氨基酸的前體蛋白剪切掉25個(gè)氨基酸信號(hào)肽后剩余的133個(gè)氨基酸片段組成。人和小鼠的IL-17分子都具有一個(gè)保守的N連接糖基化位點(diǎn)。IL-17A能夠形成分子量在35-38kDa的同源二聚體或與IL-17F形成分子量在45-58kDa的異源二聚體。成熟的人IL-17分別與小鼠IL-17、豬IL-17和黑猩猩IL-17具有61%、74%和99%的氨基酸同源性。能夠產(chǎn)生IL-17的細(xì)胞類(lèi)型主要有CD4+ Th17 T細(xì)胞、潘氏細(xì)胞、GR1+CD11b+骨髓抑制細(xì)胞、CD27-γδT細(xì)胞等。
IL-17的高親和力受體是由IL-17 RA和IL-17 RC按2:1所組成的異源多聚體。IL-17?RA是一種分子量在130kDa的Ⅰ型跨膜糖蛋白，與其他細(xì)胞因子受體、TNF受體或免疫球蛋白受體家族不存在相似性。IL-17 RC也是一種Ⅰ型跨膜糖蛋白，其分子量在90-95kDa之間，與IL-17 RA具有30%的氨基酸同源性。IL-17A和IL-17A/F都能與該受體復(fù)合物結(jié)合，發(fā)揮功能。
IL-17主要參與中性粒細(xì)胞的募集，調(diào)控細(xì)胞存活。IL-17分泌后，誘導(dǎo)基質(zhì)/成纖維細(xì)胞表達(dá)粒細(xì)胞集落刺激因子(Granulocyte Colony-Stimulating Factor, G-CSF)和干細(xì)胞因子(Stem Cell Factor, SCF)，進(jìn)而促進(jìn)中性粒細(xì)胞分化和激活。IL-17還能夠通過(guò)直接抑制中性粒細(xì)胞凋亡增加中性粒細(xì)胞數(shù)量。IL-17能夠刺激巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α、IL-1β和IL-6，TNF-α和IL-1β又能刺激內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生G-CSF，從而促進(jìn)中性粒細(xì)胞擴(kuò)增。此外，在滑膜關(guān)節(jié)，IL-17還能上調(diào)骨細(xì)胞NF-κB受體激活蛋白配體的表達(dá)，促進(jìn)破骨細(xì)胞生成，促進(jìn)骨質(zhì)吸收。
IL-17與受體結(jié)合后，通過(guò)NF-κB、C/EBPβ、C/EBPδ和MAPK信號(hào)通路，誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞產(chǎn)生IL-6、IL-8、ICAM-1和G-CSF等細(xì)胞因子。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中人IL-17的濃度，其原理見(jiàn)圖1。人IL-17特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人IL-17會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人IL-17抗體后，生物素化抗人IL-17抗體與人IL-17結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。人IL-17濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中人IL-17濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
JJJP50-1
人IL-17抗體預(yù)包被板
8孔×12條
JJJP50-2
樣品分析緩沖液
5ml
JJJP50-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
JJJP50-4
人IL-17標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
JJJP50-5
人IL-17生物素化抗體
10ml
JJJP50-6
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
JJJP50-7
洗滌液(20X)
30ml
JJJP50-8
TMB溶液
10ml
JJJP50-9
終止液
5ml
JJJP50-10
封板膜(透明)
2張
JJJP50-11
封板膜(白色)
2張
–
說(shuō)明書(shū)
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。