產(chǎn)品編號
JJP53
Human IL-13 ELISA Kit
96次
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的Human IL-13 ELISA Kit (Human Interleukin-13 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人白細胞介素13酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的IL-13的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為247pg/ml，與人IL-1α、IL-1β、IL-1Ra、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
白細胞介素13 (Interleukin-13, IL-13)是一種分子量在17kDa的免疫調(diào)節(jié)細胞因子，主要參與過敏、腫瘤和組織纖維化等病理過程。IL-13主要由Th1細胞、Th2細胞、Th17細胞、自然殺傷細胞、肥大細胞、內(nèi)臟平滑肌細胞、嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞產(chǎn)生。IL-13主要以單體形式存在，在兩個內(nèi)部二硫鍵的作用下形成4-α-螺旋結(jié)構(gòu)。成熟的人IL-13與小鼠和大鼠IL-13大約具有58%的氨基酸同源性，盡管同源性較低，但在不同物種間，IL-13仍然存在一定程度的交叉反應(yīng)性。IL-13能夠抑制巨噬細胞、成纖維細胞和內(nèi)皮細胞中促炎性細胞因子和其他細胞毒物質(zhì)產(chǎn)生。IL-13還能作用于B細胞，刺激細胞活化，誘導(dǎo)免疫球蛋白向IgE型轉(zhuǎn)化，并且上調(diào)CD23/FcεRII表達。在出現(xiàn)哮喘、氣道高反應(yīng)和組織纖維化時IL-13表達會升高。
IL-13和IL-4在一定程度上共用一個受體系統(tǒng)，因此二者在生物學(xué)效應(yīng)上具有一定相關(guān)性。IL-13與低親和力跨膜受體IL-13 Rα1結(jié)合，IL-13 Rα1能與跨膜受體IL-4 Rα形成信號傳遞復(fù)合物。這種高親和力的受體復(fù)合物在功能上同時也能作為II型IL-4受體。另外，IL-13還能與高親和力受體IL-13 Rα2結(jié)合，這種受體既能夠表達于細胞表面也能夠在以游離形式存在。IL-13 Rα2實際是IL-13的誘騙受體，主要阻止IL-13與IL-13 Rα1/IL-4 Rα復(fù)合物結(jié)合，從而阻止IL-13信號傳遞。同時IL-13 Rα2還能抑制IL-4信號應(yīng)答。在Th2型免疫應(yīng)答和炎性組織損傷時IL-13 Rα2表達會增加。除了上述功能外，IL-13 Rα2還能通過參與IL-13信號傳遞直接促進腫瘤細胞侵襲，促進組織纖維化惡化。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測樣品中人IL-13的濃度，其原理見圖2。人IL-13特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的人IL-13會與捕獲抗體結(jié)合。當加入生物素化的抗人IL-13抗體后，生物素化抗人IL-13抗體與人IL-13結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。人IL-13濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中人IL-13濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
JJP53-1
人IL-13抗體預(yù)包被板
8孔×12條
JJP53-2
樣品分析緩沖液
5ml
JJP53-3
標準品稀釋液
10ml
JJP53-4
人IL-13標準品
2-4瓶
JJP53-5
人IL-13生物素化抗體
10ml
JJP53-6
辣根過氧化物酶標記Streptavidin
10ml
JJP53-7
洗滌液(20X)
30ml
JJP53-8
TMB溶液
10ml
JJP53-9
終止液
5ml
JJP53-10
封板膜(透明)
2張
JJP53-11
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
標準品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。