產(chǎn)品編號(hào)
JJJP5
Mouse IL-13 ELISA Kit
96次
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的Mouse IL-13 ELISA Kit (Mouse IL-13 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠白細(xì)胞介素-13酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-13的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為68pg/ml，與人的IL-4、IL-13，小鼠IL-4、G-CSF、GM-CSF、IFN-γ、IL-10等均沒(méi)有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
白細(xì)胞介素13 (Interleukin-13, IL-13)是一種分子量在17kDa的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，主要參與過(guò)敏、腫瘤和組織纖維化等病理過(guò)程。IL-13主要由Th1細(xì)胞、Th2細(xì)胞、Th17細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、肥大細(xì)胞、內(nèi)臟平滑肌細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞產(chǎn)生。IL-13主要以單體形式存在，在兩個(gè)內(nèi)部二硫鍵的作用下形成4-α-螺旋結(jié)構(gòu)。成熟的小鼠IL-13與人IL-13大約具有58%的氨基酸同源性，盡管同源性較低，但在不同物種間，IL-13仍然存在一定程度的交叉反應(yīng)性。IL-13能夠抑制巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞中促炎性細(xì)胞因子和其他細(xì)胞毒物質(zhì)產(chǎn)生。IL-13還能作用于B細(xì)胞，刺激細(xì)胞活化，誘導(dǎo)免疫球蛋白向IgE型轉(zhuǎn)化，并且上調(diào)CD23/FcεRII表達(dá)。在出現(xiàn)哮喘、氣道高反應(yīng)和組織纖維化時(shí)IL-13表達(dá)會(huì)升高。
IL-13和IL-4在一定程度上共用一個(gè)受體系統(tǒng)，因此二者在生物學(xué)效應(yīng)上具有一定相關(guān)性。IL-13與低親和力跨膜受體IL-13 Rα1結(jié)合，IL-13 Rα1能與跨膜受體IL-4 Rα形成信號(hào)傳遞復(fù)合物。這種高親和力的受體復(fù)合物在功能上同時(shí)也能作為II型IL-4受體。另外，IL-13還能與高親和力受體IL-13 Rα2結(jié)合，這種受體既能夠表達(dá)于細(xì)胞表面也能夠在以游離形式存在。IL-13 Rα2實(shí)際是IL-13的誘騙受體，主要阻止IL-13與IL-13 Rα1/IL-4 Rα復(fù)合物結(jié)合，從而阻止IL-13信號(hào)傳遞。同時(shí)IL-13 Rα2還能抑制IL-4信號(hào)應(yīng)答。在Th2型免疫應(yīng)答和炎性組織損傷時(shí)IL-13 Rα2表達(dá)會(huì)增加。除了上述功能外，IL-13 Rα2還能通過(guò)參與IL-13信號(hào)傳遞直接促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲，促進(jìn)組織纖維化惡化。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中小鼠IL-13的濃度，其原理見(jiàn)圖1。小鼠IL-13特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的小鼠IL-13會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗小鼠IL-13抗體后，生物素化抗小鼠IL-13抗體與小鼠IL-13結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。小鼠IL-13濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖 。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱(chēng)
包裝
JJJP5-1
小鼠IL-13抗體預(yù)包被板
8孔×12條
JJJP5-2
樣品分析緩沖液
5ml
JJJP5-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
JJJP5-4
小鼠IL-13標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
JJJP5-5
小鼠IL-13生物素化抗體
10ml
JJJP5-6
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
JJJP5-7
洗滌液(20X)
30ml
JJJP5-8
TMB溶液
10ml
JJJP5-9
終止液
5ml
JJJP5-10
封板膜(透明)
2張
JJJP5-11
封板膜(白色)
2張
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說(shuō)明書(shū)
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱(chēng)的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。