產(chǎn)品編號(hào)
JJJP50
Mouse IL-12 JP7 ELISA Kit
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的Mouse IL-12 JP7 ELISA Kit (Mouse Interleukin-12 JP7 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠白細(xì)胞介素12 JP7酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-12 JP7的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為34.4pg/ml，與小鼠IL-12 JP30、IL-12 p40 monomer、IL-12 p40 dimer、IL-23，人IL-12 JP7、IL-12 JP30、IL-12 p40 monomer和貓IL-12 JP7等均沒(méi)有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
白細(xì)胞介素12 (Interleukin-12, IL-12)，又稱(chēng)自然殺傷細(xì)胞刺激因子(Natural Killer Cell Stimulatory Factor, NKFS)，是一種分子量在70-75kDa之間的異質(zhì)二聚體糖蛋白，所以稱(chēng)為IL-12 JP7。IL-12 JP7由兩個(gè)分子量分別為35kDa (JP30)和40kDa (p40)的亞基通過(guò)二硫鍵相連，兩個(gè)亞基間不具有氨基酸同源性。成熟的JP30亞基氨基酸長(zhǎng)度為196，包含7個(gè)半胱氨酸殘基和一個(gè)N連接的潛在糖基化位點(diǎn)，成熟的小鼠JP30亞基與人和大鼠JP30亞基分別具有63%和86%的氨基酸同源性。成熟的p40亞基氨基酸長(zhǎng)度為313，含有13個(gè)半胱氨酸殘基和5個(gè)N連接的潛在糖基化位點(diǎn)，成熟的小鼠p40與人和大鼠p40具有72%和93%的氨基酸同源性。JP30亞基與血細(xì)胞生成素具有一定的相似性，p40則與血細(xì)胞生成素受體的N端區(qū)域具有很大的相似性，這提示IL-12也許是和IL-6/s IL-6R復(fù)合物類(lèi)似的一種細(xì)胞因子-受體復(fù)合物。小鼠p40能夠以單體、同源二聚體的形式存在，也能夠與JP30亞基組成IL-12或者是與p19亞基組成IL-23。雖然IL-12通常被認(rèn)為是一種分泌型分子，但目前在小鼠和人的細(xì)胞上都發(fā)現(xiàn)了膜綁定的IL-12分子。能夠產(chǎn)生IL-12的細(xì)胞主要有1巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、單核細(xì)胞、朗格漢斯細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、小鼠CD8+樹(shù)突狀細(xì)胞和人(CD38-CD44+) B細(xì)胞。
小鼠IL-12的高親和受體由兩個(gè)I型跨膜糖蛋白組成。Rα1亞基分子量在100kDa，主要與p40亞基結(jié)合；Rα2分子量為130kDa，與Rα1沒(méi)有明顯的序列相似性，主要參與信號(hào)傳遞，與JP30和p40之間的二硫鍵相連。無(wú)論是同源二聚體形式的p40，還是IL-23都能夠與IL-12R結(jié)合，但不產(chǎn)生任何生物活性，二者均屬于IL-12的拮抗劑。p40同源二聚體還能與Rα1結(jié)合，激活小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。
IL-12能夠增強(qiáng)細(xì)胞因子活性，還能誘導(dǎo)NK細(xì)胞、T細(xì)胞、樹(shù)突狀表皮T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ。IL-12與其他IL-12家族成員一起還能夠促進(jìn)CD4+ Th1細(xì)胞在免疫應(yīng)答中發(fā)揮作用。在機(jī)體發(fā)生感染時(shí)，IL-27最先被分泌并促進(jìn)Th0細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，隨后在IL-12協(xié)助下產(chǎn)生Th1效應(yīng)細(xì)胞。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測(cè)樣品中小鼠IL-12?JP7的濃度，其原理見(jiàn)圖1。小鼠IL-12?JP7特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的小鼠IL-12?JP7會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗小鼠IL-12?JP7抗體后，生物素化抗小鼠IL-12?JP7抗體與小鼠IL-12?JP7結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。小鼠IL-12?JP7濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中小鼠IL-12?JP7濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱(chēng)
包裝
JJJP50-1
小鼠IL-12 JP7抗體預(yù)包被板
8孔×12條
JJJP50-2
樣品分析緩沖液
5ml
JJJP50-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
JJJP50-4
小鼠IL-12 JP7標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
JJJP50-5
小鼠IL-12 JP7生物素化抗體
10ml
JJJP50-6
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
JJJP50-7
洗滌液(20X)
30ml
JJJP50-8
TMB溶液
10ml
JJJP50-9
終止液
5ml
JJJP50-10
封板膜(透明)
2張
JJJP50-11
封板膜(白色)
2張
–
說(shuō)明書(shū)
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱(chēng)的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。