產(chǎn)品編號
JJP62
Mouse TIM-1/KIM-1/HAVCR ELISA Kit
96次
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的Mouse TIM-1/KIM-1/HAVCR ELISA Kit (Mouse T Cell Immunoglobulin and Mucin Domain-1 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠T細胞免疫球蛋白酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的KIM-1的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結果表明，最小檢出量為28.6pg/ml，與小鼠TIM-3、TIM-4和人的TIM-1、TIM-3、TIM-4等均沒有交叉反應，板內、板間變異系數(shù)均小于10%。
T細胞免疫球蛋白(T cell immunoglobulin and mucin domain-1, TIM-1)，又稱腎臟損傷分子(Kidney injury molecule 1, KIM-1)或甲肝病毒細胞受體(Hepatitis A virus cellular receptor 1, HAVcr1)，其分子量大小約為70-80kDa，屬于TIM家族成員，主要參與調控固有免疫和獲得性免疫應答。TIM-1屬于I型跨膜糖蛋白，結構中包括一個N端免疫球蛋白樣區(qū)域、一個具有O連接和N連接糖基化的粘蛋白區(qū)域、一個跨膜片段和一個胞質內信號域。由于基因多態(tài)性或選擇性剪切，TIM-1存在多種粘蛋白區(qū)域缺失的變體[1-2]。小鼠TIM-1與人和大鼠TIM-1分別有41%和82%的同源性。
在體內，TIM-1在脾臟B細胞上有所表達，并且是識別IL-10+調節(jié)性B細胞的標志物之一。TIM-1同時也在CD4+ T細胞、肥大細胞、樹突狀細胞、腎上皮細胞和多種粘膜上皮細胞中表達。在樹突狀細胞成熟或腎臟受損后，活化的Th2細胞和腎小管上皮細胞分別會出現(xiàn)TIM-1表達的上調。在基質金屬蛋白酶的作用下會得到游離形式的TIM-1，當腎臟發(fā)生病變時尿液中的TIM-1水平會顯著升高，因此TIM-1可以作為腎損傷的標志物之一[3]。
TIM-1作為受體能夠與多種配體結合，例如磷酯酰絲氨酸、白血球單一免疫球蛋白樣受體5 (LMIR5/CJP0700b)、TIM-1、TIM-4和多種包膜病毒糖蛋白。TIM-1與磷酯酰絲氨酸結合從而對凋亡細胞的吞噬過程進行調控。LMIR5與游離型TIM-1或膜表面的TIM-1相互作用會誘導LIMR5介導的多種骨髓來源細胞的激活，包括巨噬細胞/單核細胞、肥大細胞、中性粒細胞和樹突狀細胞。配體誘導的TIM-1信號傳遞能夠刺激T細胞的活化，增加Th2型細胞因子的產(chǎn)生[4]。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中小鼠TIM-1的濃度，其原理見圖1。小鼠TIM-1特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的小鼠TIM-1會與捕獲抗體結合。當加入生物素化的抗小鼠TIM-1抗體后，生物素化抗小鼠TIM-1抗體與小鼠TIM-1結合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。小鼠TIM-1濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
JJP62-1
小鼠TIM-1/KIM-1/HAVCR抗體預包被板
8孔×12條
JJP62-2
樣品分析緩沖液
5ml
JJP62-3
標準品稀釋液
10ml
JJP62-4
小鼠TIM-1/KIM-1/HAVCR標準品
2-4瓶
JJP62-5
小鼠TIM-1/KIM-1/HAVCR生物素化抗體
10ml
JJP62-6
辣根過氧化物酶標記Streptavidin
10ml
JJP62-7
洗滌液(20X)
30ml
JJP62-8
TMB溶液
10ml
JJP62-9
終止液
5ml
JJP62-10
封板膜(透明)
2張
JJP62-11
封板膜(白色)
2張
—
說明書
1份
保存條件：
標準品4℃保存，1-2周內有效，-20℃保存6個月內有效，試劑盒其它組分4℃保存6個月內有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結晶，如果發(fā)現(xiàn)有結晶，請室溫水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻對保證反應結果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。