產(chǎn)品編號
JJP63
Rat TIM-1/KIM-1/HAVCR ELISA Kit
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的Rat TIM-1/KIM-1/HAVCR ELISA Kit (Rat T cell Immunoglobulin and Mucin domain-1Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即大鼠T細(xì)胞免疫球蛋白酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測大鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的TIM-1/KIM-1/HAVCR的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為13.6pg/ml，與人TIM-1、TIM-4、小鼠TIM-1、TIM-4等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
T細(xì)胞免疫球蛋白(T?cell?Immunoglobulin?and?Mucin?Domain-1,TIM-1)，又稱腎臟損傷分子(Kidney?Injury?Molecule?1, KIM-1)或甲肝病毒細(xì)胞受體(Hepatitis?A?Virus?Cellular?Receptor?1,?HAVcr1)，屬于TIM家族成員，主要參與調(diào)控固有免疫和獲得性免疫應(yīng)答。TIM-1屬于I型跨膜糖蛋白，結(jié)構(gòu)中包括一個N端免疫球蛋白樣區(qū)域、一個具有O連接和N連接糖基化的粘蛋白區(qū)域、一個跨膜片段和一個胞質(zhì)內(nèi)信號域。由于基因多態(tài)性或選擇性剪切，TIM-1存在多種粘蛋白區(qū)域缺失的變體。大鼠TIM-1的胞外域與小鼠和人TIM-1的相應(yīng)區(qū)域分別具有82%和41%的氨基酸序列相似性。
在體內(nèi)，TIM-1在脾臟B細(xì)胞上有所表達，并且是識別IL-10+調(diào)節(jié)性B細(xì)胞的標(biāo)志物之一。TIM-1同時也在CD4+T細(xì)胞、肥大細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞和多種粘膜上皮細(xì)胞中表達。在樹突狀細(xì)胞成熟或腎臟受損后，活化的Th2細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞分別會出現(xiàn)TIM-1表達的上調(diào)。在基質(zhì)金屬蛋白酶的作用下會得到游離形式的TIM-1，當(dāng)腎臟發(fā)生病變時尿液中的TIM-1水平會顯著升高，因此TIM-1可以作為腎損傷的標(biāo)志物之一。
TIM-1作為受體能夠與多種配體結(jié)合，例如磷酯酰絲氨酸、白血球單一免疫球蛋白樣受體5?(LMIR5/CJP0700b)、TIM-1、TIM-4和多種包膜病毒糖蛋白。TIM-1與磷酯酰絲氨酸結(jié)合從而對凋亡細(xì)胞的吞噬過程進行調(diào)控。LMIR5與游離型TIM-1或膜表面的TIM-1相互作用會誘導(dǎo)LIMR5介導(dǎo)的多種骨髓來源細(xì)胞的激活，包括巨噬細(xì)胞/單核細(xì)胞、肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。配體誘導(dǎo)的TIM-1信號傳遞能夠刺激T細(xì)胞的活化，增加Th2型細(xì)胞因子的產(chǎn)生。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測樣品中大鼠TIM-1的濃度，其原理見圖1。大鼠TIM-1特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的大鼠TIM-1會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗大鼠TIM-1抗體后，生物素化抗大鼠TIM-1抗體與大鼠TIM-1結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。大鼠TIM-1濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中大鼠TIM-1濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
JJP63-1
大鼠TIM-1/KIM-1/HAVCR抗體預(yù)包被板
8孔×12條
JJP63-2
樣品分析緩沖液
5ml
JJP63-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
JJP63-4
大鼠TIM-1/KIM-1/HAVCR標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
JJP63-5
大鼠TIM-1/KIM-1/HAVCR生物素化抗體
10ml
JJP63-6
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
JJP63-7
洗滌液(20X)
30ml
JJP63-8
TMB溶液
10ml
JJP63-9
終止液
5ml
JJP63-10
封板膜(透明)
2張
JJP63-11
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效；試劑盒其它組份4℃保存6個月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組份嚴(yán)禁凍存。
注意事項：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
