產(chǎn)品編號
PC205
Human CXCL12/SDF-1 ELISA Kit
96次
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的Human CXCL12/SDF-1 ELISA Kit (Human Stromal Cell-Derived Factor1 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人趨化因子12/基質(zhì)細胞衍生因子1酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的CXCL12/SDF-1的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為22.7pg/ml，與人和鼠的IP-10/CRG-2等均沒有交叉反應(yīng)，能識別小鼠SDF-1α。板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
基質(zhì)細胞衍生因子1 (Stromal Cell-Derived Factor1, SDF-1)，又稱為C-X-C motif chemokine 12 (CXCL12)，屬于CXC趨化因子家族，與其它CXC趨化因子和CC (β)趨化因子亞族幾乎不具有氨基酸同源性。編碼其它趨化因子的基因主要集中在人第4和第17號染色體上，而編碼SDF-1的基因則主要位于人第10號染色體。在不同物種之間，SDF-1的基因具有高度保守性，在基因序列上人SDF-1和小鼠SDF-1具有99%的相似性。
SDF-1存在有兩種剪接變體，分別是SDF-1α和SDF-1β。SDF-1α多肽長度為89個氨基酸，SDF-1β與SDF-1α序列基本相同，僅在C端多了4個氨基酸殘基。SDF-1是一種強堿性的肝素結(jié)合蛋白，在SDF-1序列中不存在糖基化位點。SDF-1與CXCR4受體(LESRT/fulin)結(jié)合并激活受體，受體首先發(fā)生二聚化，隨后在JAK2/JAK3激酶的作用下受體發(fā)生磷酸化，進而招募并使得STATs發(fā)生磷酸化，從而發(fā)揮生物學作用。
SDF-1主要由骨髓間充質(zhì)干細胞表達，存在于多種組織中。SDF-1是淋巴細胞和單核細胞的化學引誘物，并且能夠增強B細胞增殖，因此人們認為SDF-1更像是一種免疫監(jiān)督因子而并非炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)因子。SDF-1在淋巴細胞和造血細胞歸巢中也起了重要作用。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中人CXCL12/SDF-1的濃度，其原理見圖1。人CXCL12/SDF-1特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的人CXCL12/SDF-1會與捕獲抗體結(jié)合。當加入生物素化的抗人CXCL12/SDF-1抗體后，生物素化抗人CXCL12/SDF-1抗體與人CXCL12/SDF-1結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。人CXCL12/SDF-1濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中人CXCL12/SDF-1濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
PC205-1
人CXCL12/SDF-1抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PC205-2
樣品分析緩沖液
5ml
PC205-3
標準品稀釋液(5X)
10ml
PC205-4
人CXCL12/SDF-1標準品
2-4瓶
PC205-5
人CXCL12/SDF-1生物素化抗體
10ml
PC205-6
辣根過氧化物酶標記Streptavidin
10ml
PC205-7
洗滌液(20X)
30ml
PC205-8
TMB溶液
10ml
PC205-9
終止液
5ml
PC205-10
封板膜(透明)
2張
PC205-11
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
標準品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。