產(chǎn)品編號
PG411
Human Ghrelin ELISA Kit
96次
3398
的Human Ghrelin ELISA Kit (Human Ghrelin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人饑餓素酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的Ghrelin的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為29pg/ml，與人Obestatin、Leptin均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
Ghrelin是生長激素促分泌素受體的第一個內(nèi)源性配體，由28個氨基酸組成，是生長激素促分泌素受體(growth hormone secretagogue receptor, GHSR)的內(nèi)源性配體。Ghrelin由兩種存在形式，即N端3位絲氨酸殘基辛酰化和非?；腉hrelin。人體血液中2/3的Ghrelin由胃黏膜層α細胞分泌，其余大部分由小腸α樣細胞分泌。其它器官如胰腺、腎臟、淋巴組織、甲狀腺、腎上腺、心臟、肺、垂體等也分泌少量Ghrelin。
Ghrelin作為GHSR的配體，與生長激素的分泌呈正比，能明顯促進生長激素(growth hormone, GH)的分泌。此外，Ghrelin還能促進飲食、促進腸胃蠕動、降低血壓、促進細胞增殖、抑制炎癥因子釋放等生物學作用。一些研究表明，Ghrelin具有調(diào)控飲食和影響體重的作用，可調(diào)節(jié)糖代謝和脂代謝，使機體維持一定的平衡；對心血管系統(tǒng)的功能有直接調(diào)節(jié)作用，可能能是通過舒張動脈血管的方式改變動脈壓力；在正常細胞和腫瘤細胞中均能調(diào)控細胞增殖；可以通過促進免疫細胞增殖及抑制免疫細胞釋放炎癥前細胞因子對免疫系統(tǒng)的功能進行調(diào)節(jié)。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中人Ghrelin的濃度，其原理見圖1。人Ghrelin特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的人Ghrelin會與捕獲抗體結(jié)合。當加入生物素化的抗人Ghrelin抗體后，生物素化抗人Ghrelin抗體與人Ghrelin結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。人Ghrelin濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
PG411-1
人Ghrelin抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PG411-2
樣本分析緩沖液
5ml
PG411-3
標準品稀釋液
10ml
PG411-4
人Ghrelin標準品
2-4瓶
PG411-5
人Ghrelin生物素化抗體
10ml
PG411-6
辣根過氧化物酶標記Streptavidin
10ml
PG411-7
洗滌液(20X)
30ml
PG411-8
TMB溶液
10ml
PG411-9
終止液
5ml
PG411-10
封板膜(透明)
2張
PG411-11
封板膜(白色)
2張
—
說明書
1份
保存條件：
標準品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。