產(chǎn)品編號(hào)
PH385
Human HGF ELISA Kit
96次
3198
的Human HGF ELISA Kit (Human Hepatocyte Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人肝細(xì)胞生長因子酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的HGF的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為112.7pg/ml，與人EGF、G-CSF、GM-CSF、HGF R、M-CSF、PDGF-AA、PDGF-AB、PDGF-BB、TGF-β1、VEGF，小鼠HGF等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
肝細(xì)胞生長因子(Hepatocyte Growth Factor, HGF)，又稱散射因子、肝細(xì)胞生成素A和乳腺生長因子，是一種多效性糖蛋白，參與調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的生長和遷移。HGF分子具有一個(gè)N端的PAN/APPLE樣區(qū)域、4個(gè)Kringle區(qū)以及一個(gè)催化活性絲氨酸蛋白酶樣區(qū)域。HGF通常以無活性的單鏈前體肽形式分泌，在組織損傷部位，無活性的HGF能夠在絲氨酸蛋白酶的作用下切除相應(yīng)區(qū)域從而得到有活性的HGF?；钚訦GF是由60kDa的N端α鏈和30kDa的C端β鏈通過二硫鍵相連形成的異質(zhì)二聚體。在肝臟損傷、急性腎衰竭、心肌衰弱、I型糖尿病和腫瘤等病理?xiàng)l件下，血液中HGF水平會(huì)出現(xiàn)明顯升高。人HGF與牛、犬、貓、小鼠和大鼠HGF具有91-94%的氨基酸同源性，具有明顯的種間交叉反應(yīng)性。
HGF主要由成纖維細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)，但是HGF受體則主要表達(dá)在上皮細(xì)胞中，這說明HGF能夠以旁分泌的形式參與調(diào)節(jié)基質(zhì)與上皮細(xì)胞間的相互作用。HGF能夠誘導(dǎo)包括上皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞在內(nèi)的多種類型細(xì)胞的增殖和遷移。HGF能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生有絲分裂，但在某些情況下卻能抑制其增殖。在器官形成、組織修復(fù)和血管生成時(shí)，HGF能夠促進(jìn)上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)形成。HGF調(diào)節(jié)血管生成和促進(jìn)上皮細(xì)胞有絲分裂的能力是其協(xié)助實(shí)體瘤發(fā)展的重要基礎(chǔ)。HGF還能作用于胰島細(xì)胞促進(jìn)其存活、增殖和胰島素的產(chǎn)生。另外，HGF能夠通過誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞耐受、抑制T細(xì)胞激活、抑制IL-17表達(dá)和炎性細(xì)胞浸潤來抑制炎癥反應(yīng)。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測(cè)樣品中人HGF的濃度，其原理見圖1。人HGF特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人HGF會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人HGF抗體后，生物素化抗人HGF抗體與人HGF結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會(huì)催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。人HGF濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中人HGF濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
PH385-1
人HGF抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PH385-2
樣品分析緩沖液
5ml
PH385-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
PH385-4
人HGF標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PH385-5
人HGF生物素化抗體
10ml
PH385-6
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PH385-7
洗滌液(20X)
30ml
PH385-8
TMB溶液
10ml
PH385-9
終止液
5ml
PH385-10
封板膜(透明)
2張
PH385-11
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。