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Human HGF ELISA Kit

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產(chǎn)品編號(hào)

PH385
Human HGF ELISA Kit
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3198

的Human HGF ELISA Kit (Human Hepatocyte Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的HGF的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為112.7pg/ml，與人EGF、G-CSF、GM-CSF、HGF R、M-CSF、PDGF-AA、PDGF-AB、PDGF-BB、TGF-β1、VEGF，小鼠HGF等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Hepatocyte Growth Factor, HGF)，又稱散射因子、肝細(xì)胞生成素A和乳腺生長(zhǎng)因子，是一種多效性糖蛋白，參與調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的生長(zhǎng)和遷移。HGF分子具有一個(gè)N端的PAN/APPLE樣區(qū)域、4個(gè)Kringle區(qū)以及一個(gè)催化活性絲氨酸蛋白酶樣區(qū)域。HGF通常以無活性的單鏈前體肽形式分泌，在組織損傷部位，無活性的HGF能夠在絲氨酸蛋白酶的作用下切除相應(yīng)區(qū)域從而得到有活性的HGF。活性HGF是由60kDa的N端α鏈和30kDa的C端β鏈通過二硫鍵相連形成的異質(zhì)二聚體。在肝臟損傷、急性腎衰竭、心肌衰弱、I型糖尿病和腫瘤等病理?xiàng)l件下，血液中HGF水平會(huì)出現(xiàn)明顯升高。人HGF與牛、犬、貓、小鼠和大鼠HGF具有91-94%的氨基酸同源性，具有明顯的種間交叉反應(yīng)性。
HGF主要由成纖維細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)，但是HGF受體則主要表達(dá)在上皮細(xì)胞中，這說明HGF能夠以旁分泌的形式參與調(diào)節(jié)基質(zhì)與上皮細(xì)胞間的相互作用。HGF能夠誘導(dǎo)包括上皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞在內(nèi)的多種類型細(xì)胞的增殖和遷移。HGF能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生有絲分裂，但在某些情況下卻能抑制其增殖。在器官形成、組織修復(fù)和血管生成時(shí)，HGF能夠促進(jìn)上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)形成。HGF調(diào)節(jié)血管生成和促進(jìn)上皮細(xì)胞有絲分裂的能力是其協(xié)助實(shí)體瘤發(fā)展的重要基礎(chǔ)。HGF還能作用于胰島細(xì)胞促進(jìn)其存活、增殖和胰島素的產(chǎn)生。另外，HGF能夠通過誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞耐受、抑制T細(xì)胞激活、抑制IL-17表達(dá)和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)來抑制炎癥反應(yīng)。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測(cè)樣品中人HGF的濃度，其原理見圖1。人HGF特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人HGF會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人HGF抗體后，生物素化抗人HGF抗體與人HGF結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會(huì)催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。人HGF濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中人HGF濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。

一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝

PH385-1

人HGF抗體預(yù)包被板

8孔×12條

PH385-2

樣品分析緩沖液

5ml

PH385-3

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

10ml

PH385-4

人HGF標(biāo)準(zhǔn)品

2-4瓶

PH385-5

人HGF生物素化抗體

10ml

PH385-6

辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin

10ml

PH385-7

洗滌液(20X)

30ml

PH385-8

TMB溶液

10ml

PH385-9

終止液

5ml

PH385-10

封板膜(透明)

2張

PH385-11

封板膜(白色)

2張

–

說明書

1份

保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

OrganRegen-Recombinant Human HGF（871-HGF）

發(fā)表于由

Recombinant Human HGF

貨號(hào)：871-HGF

規(guī)格：1mg

100ug

品牌：OrganRegen

產(chǎn)品介紹

DESCRIPTION

Background:

HGF, is a pleiotropic protein in the plasminogen subfamily of S1 peptidases. Human HGF is secreted as an inactive 728 amino acid (aa) single chain propeptide. It is cleaved after the fourth Kringle domain by a serine protease to form bioactive disulfide?linked HGF with a 60 kDa alpha and 30 kDa beta chain. HGF binds heparan-sulfate proteoglycans and the widely expressed receptor tyrosine kinase, HGF R/c-MET [1, 2]. HGF-dependent c-MET activation is implicated in the development of many human cancers [3]. HGF regulates epithelial morphogenesis by inducing cell scattering and branching tubulogenesis. HGF can also alter epithelium morphology by the induction of nectin?1 alpha ectodomain shedding, an adhesion protein component of adherens junctions (13). In the thyroid, HGF induces the proliferation, motility, and loss of differentiation markers of thyrocytes and inhibits TSH?stimulated iodine uptake. HGF promotes the motility of cardiac stem cells in damaged myocardium [4].

 

技術(shù)參數(shù)

Source:

Chinese Hamster Ovary cell line

Protein Construction:

A DNA sequence encoding the amino acids (Gln32-Ser728) of human HGF (Accession Number: P14210) was expressed.

Synonyms:

Hepatopoietin A; HGF; HGFB; HPTA; HPTAhepatocyte growth factor SPECIFICATIONS

Purity:

≥ 95%, by SDS-PAGE visualized with quantitative densitometry by Coomassie? Blue Staining.

Biological Activity:

Measured in CellTiter-Glo 3D Cell Viability Assay using human liver ductal organoids. The ED50 for this effect is 10-20 ng/ml.

Endotoxin Level:

<0.10 EU per 1 μg of the protein by the LAL method

Calculated Molecular Weight:

53.7 kDa ( alpha chain), 26 kDa ( beta chain)

SDS-PAGE:

60 kDa, and 33-34 kDa, reducing conditions

 DATA

OrganRegen-Recombinant Human HGF（871-HGF）

FORMULATION AND STORAGE

Formulation:

The product is lyophilized from a 0.22μm filtered solution in PBS.

Shipping:

The product is shipped on ice. Upon receipt, store it immediately as methods recommended below.

Reconstitution:

Reconstitute in sterile PBS buffer containing 0.1 % BSA to a concentration of 0.1-1.0 mg/mL.

Stability & Storage:

24 months, -20 to -70 °C, under powder state;

12 months, -20 to -70 °C, under sterile conditions after reconstitution;

2 month, 2 to 8 °C under sterile conditions after reconstitution;

avoid repeated freeze-thaw cycles.

References:

  1. Gherardi, E., et al., Functional map and domain structure of MET, the product of the c-met protooncogene and receptor for hepatocyte growth factor/scatter factor. Proc Natl Acad Sci U S A, 2003. 100(21).

  2. Mizuno, K., et al., Hairpin loop and second kringle domain are essential sites for heparin binding and biological activity of hepatocyte growth factor. J Biol Chem, 1994. 269(2).

  3. Corso, S., P. Comoglio, and S. Giordano, Cancer therapy: can the challenge be MET? Trends in molecular medicine, 2005. 11(6).

  4. Urbanek, K., et al., Cardiac stem cells possess growth factor-receptor systems that after activation regenerate the infarcted myocardium, improving ventricular function and long-term survival. Circ Res, 2005. 97(7).