產(chǎn)品編號(hào)
PA023
Human Angiogenin ELISA Kit
96次
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??????的Human Angiogenin ELISA Kit (Human Angiogenin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人血管生成素酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的Angiogenin的ELISA試劑盒。。
??????本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為4.75pg/ml，與EGF、GM-CSF、MIP-1α、MIP-1β、TGF-α、TGF-β1，小鼠 EGF、GM-CSF、MIP-1α等均沒(méi)有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
??????人血管生成素(Angiogenin, ANG)是一種分子量為14kDa的單鏈非糖基化蛋白，屬于核糖核酸酶中RISBASE家族。該家族成員不僅具有核糖核酸酶活性，還具有一些特殊的生物學(xué)功能。ANG氨基酸長(zhǎng)度為123，包括3個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵。人ANG與小鼠ANG具有75%的氨基酸同源性，且具有一定的種間交叉反應(yīng)。能夠表達(dá)ANG的細(xì)胞主要有血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、結(jié)腸柱狀上皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和部分腫瘤細(xì)胞。
??????ANG主要參與血管的形成過(guò)程。基底膜的降解是血管新生過(guò)程中內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生遷移的先決條件。ANG首先與肌動(dòng)蛋白結(jié)合，隨后肌動(dòng)蛋白-ANG復(fù)合物發(fā)生裂解，激活組織血纖維蛋白溶酶原。這一過(guò)程產(chǎn)生的血纖維蛋白溶酶會(huì)降解基底膜中的層粘連蛋白和纖連蛋白。盡管ANG主要作用于血管外或血管周圍，但是在血液中也同樣檢測(cè)到了ANG的存在，在一些病理?xiàng)l件下，ANG的濃度還會(huì)出現(xiàn)明顯增加，例如在胰腺癌和動(dòng)脈閉塞性病變患者體內(nèi)ANG水平都有所升高。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中人Angiogenin的濃度，其原理見(jiàn)圖1。人Angiogenin特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人Angiogenin會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人Angiogenin抗體后，生物素化抗人Angiogenin抗體與人Angiogenin結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。人Angiogenin濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中人Angiogenin濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
PA023-1
人Angiogenin抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PA023-2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(5X)
20ml
PA023-3
人Angiogenin標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PA023-4
人Angiogenin生物素化抗體
10ml
PA023-5
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PA023-6
洗滌液(20X)
30ml
PA023-7
TMB溶液
10ml
PA023-8
終止液
5ml
PA023-9
封板膜(透明)
2張
PA023-10
封板膜(白色)
2張
–
說(shuō)明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。