產(chǎn)品編號(hào)
PA026
Human ACE ELISA Kit
96次
3409
生產(chǎn)的Human ACE ELISA Kit (Human Angiotensin I Converting Enzyme Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人血管緊張素轉(zhuǎn)化酶酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的ACE的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為116pg/ml，與人ACE2沒(méi)有交叉反應(yīng)，與小鼠的ACE有1%的交叉反應(yīng)性。板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
血管緊張素I轉(zhuǎn)換酶(Angiotensin I Converting Enzyme, ACE)又稱(chēng)肽基二肽酶A (Peptidyl-dipeptidase A)或CD143，是一種鋅金屬肽酶，對(duì)血壓控制和水、鹽代謝很重要。它從血管緊張素I中切割C端二肽，產(chǎn)生八肽血管緊張素II (Angiotensin II) (一種有效的血管升壓劑)。它還可以通過(guò)連續(xù)去除兩個(gè)c端二肽，使緩激肽(Bradykinin) (一種有效的血管擴(kuò)張劑)失活。除了這兩種底物外，ACE還能從具有游離C端的各種寡肽中切割C端二肽。由于其位置和特異性，ACE在免疫、繁殖和神經(jīng)肽調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。例如，ACE能降解阿爾茨海默淀粉樣β-肽(Amyloid β-peptide, Aβ)，延緩Aβ聚集、沉積、纖維形成，并抑制細(xì)胞毒性[1]。ACE抑制劑現(xiàn)在被用于臨床治療高血壓、充血性心力衰竭和心肌梗死、內(nèi)皮功能障礙和腎臟疾病[2]。
分泌酶(Secretases)使I型膜蛋白ACE脫落，溶于血清、血漿、精液、羊水和腦脊液等。兩個(gè)ACE亞型從一個(gè)基因中利用替代啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄。體細(xì)胞ACE (Somatic ACE, sACE)發(fā)現(xiàn)于內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞和神經(jīng)元細(xì)胞中，包括兩個(gè)高度相似的活性域，稱(chēng)為N-結(jié)構(gòu)域和C-結(jié)構(gòu)域，每個(gè)域包含鋅結(jié)合的HExxH一致序列。生殖細(xì)胞ACE (Germinal ACE, gACE)只存在于睪丸中，除了一個(gè)N端67個(gè)氨基酸殘基的gACE特異性序列外，還包括一個(gè)與sACE C-結(jié)構(gòu)域相同的單一催化活性結(jié)構(gòu)域。這兩種組織特異性同工酶的生理功能是不可相互替換的[3]。例如，在ACE基因敲除的雄性小鼠中，精子特異性表達(dá)gACE，而不是sACE，使其恢復(fù)了生育能力。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中人ACE的濃度，其原理見(jiàn)圖1。人ACE特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人ACE會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人ACE抗體后，生物素化抗人ACE抗體與人ACE結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。人ACE濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱(chēng)
包裝
PA026-1
人ACE抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PA026-2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(5X)
20ml
PA026-3
人ACE標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PA026-4
人ACE生物素化抗體
10ml
PA026-5
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PA026-6
洗滌液(20X)
30ml
PA026-7
TMB溶液
10ml
PA026-8
終止液
5ml
PA026-9
封板膜(透明)
2張
PA026-10
封板膜(白色)
2張
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說(shuō)明書(shū)
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱(chēng)的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。