產(chǎn)品編號(hào)
PJJP010091
Human C3a ELISA Kit
96次
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的Human C3aELISA Kit(Human C3aEnzyme-Linked ImmunoSorbent AssayKit)，即人補(bǔ)體成分C3a酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的C3a的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為42pg/ml，與人的C5a等沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
補(bǔ)體系統(tǒng)(complement system)是由30多種血漿蛋白和膜蛋白組成，廣泛存在于血液、組織液和細(xì)胞表面，是一種具有精密調(diào)控機(jī)制的蛋白反應(yīng)系統(tǒng)。補(bǔ)體的主要生理功能是促進(jìn)吞噬細(xì)胞的吞噬能力和溶解靶細(xì)胞，因此是機(jī)體免疫防御機(jī)制的重要組成部分。補(bǔ)體C3a是補(bǔ)體固有分子C3的活化裂解產(chǎn)物。在C3轉(zhuǎn)化酶的作用下，C3被激活裂解成C3a和C3b兩個(gè)具有生物學(xué)活性的片段。C3b主要參與補(bǔ)體調(diào)理作用。C3a是一個(gè)分子量約為65-95kDa、帶正電荷的強(qiáng)堿性多肽，它由86個(gè)氨基酸組成，具有趨化和激活白細(xì)胞，促進(jìn)白細(xì)胞脫顆粒、釋放組胺等炎癥介質(zhì)的功能。C3a參與補(bǔ)體系統(tǒng)三個(gè)激活途徑，包括經(jīng)典途徑、旁路途徑和凝集素途徑。C3a、C4a、C5a這三種補(bǔ)體激活時(shí)產(chǎn)生的活性片段統(tǒng)稱為過敏毒素(anaphylatoxin,AT)，它們作為配體能與炎癥細(xì)胞表面相應(yīng)受體結(jié)合，起到啟動(dòng)、調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的作用。
C3a參與先天性免疫和后天獲得性免疫過程。在過敏引起的支氣管炎性反中，C3a活化肥大細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，觸發(fā)肥大細(xì)胞脫顆粒反應(yīng)。C3a能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞及其它細(xì)胞對脂多糖引起的前列腺素、細(xì)胞因子及趨化因子等分泌的增加。此外，C3a能增強(qiáng)Th2型炎性反應(yīng)，刺激平滑肌細(xì)胞收縮和白細(xì)胞的趨化性。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中人C3a的濃度，其原理見圖1。人C3a特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人C3a會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人C3a抗體后，生物素化抗人C3a抗體與人C3a結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會(huì)催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測。人C3a濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
PJJP010091-1
人C3a抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PJJP010091-2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(5X)
60ml
PJJP010091-3
人C3a標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PJJP010091-4
人C3a生物素化抗體
10ml
PJJP010091-5
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PJJP010091-6
洗滌液(20X)
30ml
PJJP010091-7
TMB溶液
10ml
PJJP010091-8
終止液
5ml
PJJP010091-9
封板膜(透明)
2張
PJJP010091-10
封板膜(白色)
2張
—
說明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測試，所以請勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測時(shí)，請獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。