產(chǎn)品編號(hào)
PJJP010094
Human C5a ELISA Kit
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的Human C5aELISA Kit(Human C5aEnzyme-Linked ImmunoSorbent AssayKit)，即人補(bǔ)體成分C5a酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的C5a的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為17.5pg/ml，與人C3a沒(méi)有交叉反應(yīng)，與C3有25%的交叉反應(yīng)性，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
補(bǔ)體系統(tǒng)(complement system)是由30多種血漿蛋白和膜蛋白組成，廣泛存在于血液、組織液和細(xì)胞表面，是一種具有精密調(diào)控機(jī)制的蛋白反應(yīng)系統(tǒng)。補(bǔ)體的主要生理功能是促進(jìn)吞噬細(xì)胞的吞噬能力和溶解靶細(xì)胞，因此是機(jī)體免疫防御機(jī)制的重要組成部分。C5a是由蛋白酶C5轉(zhuǎn)化酶將補(bǔ)體組分C5切割成C5a和C5b片段而釋放的蛋白質(zhì)片段，相對(duì)分子質(zhì)量約為11kDa。人的C5a與小鼠和大鼠的C5a分別有60%和54%的同源性。C5起源于肝細(xì)胞，但其也可以在巨噬細(xì)胞中合成。在巨噬細(xì)胞中合成時(shí)，可能導(dǎo)致C5a的局部增加。
C5a是一種趨化劑和過(guò)敏毒素，是補(bǔ)體裂解片段中顯示過(guò)敏毒素作用最強(qiáng)的介質(zhì)，是先天免疫必不可少的一部分，也與適應(yīng)性免疫有關(guān)，其含量的增加與許多炎癥性疾病相關(guān)。C5a可不依賴(lài)肥大細(xì)胞釋放組胺，而是通過(guò)直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞而增加血管的通透性，刺激平滑肌收縮。高濃度的C5a是中性粒細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的趨化劑，可誘導(dǎo)這些細(xì)胞順濃度梯度方向移動(dòng)。C5a與C5aR(CD88)結(jié)合，激活下游G蛋白偶聯(lián)的通路，引起中性粒細(xì)胞趨化性和內(nèi)皮細(xì)胞的活化。C5a也會(huì)引起巨噬細(xì)胞與中性粒細(xì)胞的急劇氧化。此外，C5a對(duì)免疫應(yīng)答有明顯的增強(qiáng)作用，可誘導(dǎo)單核細(xì)胞分泌IL-1、IL-6、IL-8及TNF-α等細(xì)胞因子，促進(jìn)抗原及同種異體抗原誘導(dǎo)的T細(xì)胞增殖及B細(xì)胞產(chǎn)生抗體等。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中人C5a的濃度，其原理見(jiàn)圖1。人C5a特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人C5a會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人C5a抗體后，生物素化抗人C5a抗體與人C5a結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。人C5a濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度。
圖1.雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱(chēng)
包裝
PJJP010094-1
人C5a抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PJJP010094-2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(5X)
60ml
PJJP010094-3
人C5a標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PJJP010094-4
人C5a生物素化抗體
10ml
PJJP010094-5
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PJJP010094-6
洗滌液(20X)
30ml
PJJP010094-7
TMB溶液
10ml
PJJP010094-8
終止液
5ml
PJJP010094-9
封板膜(透明)
2張
PJJP010094-10
封板膜(白色)
2張
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說(shuō)明書(shū)
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。/p>
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱(chēng)的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
