產(chǎn)品編號(hào)
PI495
Rat ICAM-1/CD54 ELISA Kit
96次
3198
的Rat ICAM-1/CD54 ELISA Kit (Rat Intercellular Adhesion Molecule 1 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit),即大鼠細(xì)胞間粘附分子1酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒,是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)大鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的ICAM-1/CD54的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明,最小檢出量為53.2pg/ml,與GDNF、GM-CSF、TNF-α、IL-1α、IL-1β、IL-2 、IL-4 、PDGF-BB、IL-10,人 ICAM,小鼠ICAM等均沒(méi)有交叉反應(yīng),板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
大鼠細(xì)胞間粘附分子(Intercellular Adhesion Molecule 1, ICAM-1),又稱(chēng)CD54,是一種分子量在80-110kDa之間的I型跨膜糖蛋白,在多種細(xì)胞上都有表達(dá)。ICAM-1分子共有545個(gè)氨基酸,其中包括27個(gè)氨基酸信號(hào)肽,466個(gè)氨基酸的胞外域、25個(gè)氨基酸的跨膜域和27個(gè)氨基酸的胞質(zhì)域。在胞外域具有5個(gè)免疫球蛋白樣區(qū)域和11個(gè)潛在的N連接糖基化位點(diǎn)。N端的第一個(gè)免疫球蛋白區(qū)域(D1)能夠與淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原1 (Lymphocyte Function Associated Antigen 1, LFA-1)結(jié)合,而第三個(gè)免疫球蛋白區(qū)域則能與Mac-1結(jié)合。膜結(jié)合的ICAM-1通常以二聚體形式存在,但單體的ICAM-1同樣也能夠與IFA-1結(jié)合。通過(guò)MMP-9及彈性蛋白酶介導(dǎo)的蛋白水解作用能夠得到游離的ICAM-1。游離的ICAM-1二聚體與LFA-1具有更高的親和力。成熟的大鼠ICAM-1與小鼠ICAM-1、人ICAM-1、犬ICAM-1和豬ICAM-1分別具有77%、52%、53%和49%的氨基酸同源性。
表達(dá)ICAM-1的細(xì)胞主要有平滑肌細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、氣道上皮細(xì)胞、記憶T細(xì)胞、B細(xì)胞、漿細(xì)胞、單核細(xì)胞、紅系祖細(xì)胞、活化的嗜酸性粒細(xì)胞及中性粒細(xì)胞、施萬(wàn)細(xì)胞、黑色素細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞等。目前ICAM-1已知存在4種配體(或輔助受體),其中兩種分別是整合素LFA-1/αLβ2 (CD11a/CD18)和Mac-1/αMβ2 (CD11b/CD18)。整合素β2主要表達(dá)在白細(xì)胞上,淋巴細(xì)胞主要表達(dá)LFA-1,而在自然殺傷細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞二者都有所表達(dá)。剩余兩種配體則分別為載唾液酸蛋白和纖維蛋白原。
ICAM-1作為一種跨膜分子主要參與細(xì)胞遷移、抗原呈遞和白細(xì)胞激活。當(dāng)與LFA-1結(jié)合后,ICAM-1能夠產(chǎn)生三種效應(yīng):炎癥發(fā)生時(shí),表達(dá)ICAM-1的內(nèi)皮細(xì)胞能夠調(diào)節(jié)IFA-1+的白細(xì)胞遷移并粘附在相應(yīng)內(nèi)皮細(xì)胞上,另外,表達(dá)ICAM-1的抗原提呈細(xì)胞和T細(xì)胞還能創(chuàng)造一個(gè)粘附界面,從而延長(zhǎng)抗原呈現(xiàn)時(shí)間;ICAM-1配體能夠?qū)Ρ磉_(dá)ICAM-1的細(xì)胞產(chǎn)生單一的誘導(dǎo)效應(yīng),例如表達(dá)ICAM-1的內(nèi)皮細(xì)胞會(huì)將信號(hào)傳遞至細(xì)胞內(nèi),從而導(dǎo)致細(xì)胞骨架重構(gòu)和內(nèi)皮細(xì)胞收縮。當(dāng)作用于T細(xì)胞時(shí),ICAM-1激活會(huì)誘導(dǎo)幼稚T細(xì)胞增殖以及Th1細(xì)胞因子分泌;ICAM-1還能作為一個(gè)“被動(dòng)配體”,促進(jìn)LFA-1的調(diào)節(jié)活性。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中大鼠ICAM-1/CD54的濃度,其原理見(jiàn)圖1。大鼠ICAM-1/CD54特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上,當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí),其中的大鼠ICAM-1/CD54會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗大鼠ICAM-1/CD54抗體后,生物素化抗大鼠ICAM-1/CD54抗體與大鼠ICAM-1/CD54結(jié)合,形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin),由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合,因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液,固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì),在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。大鼠ICAM-1/CD54濃度與A450值呈正比,通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,對(duì)照樣品吸光度值,即可計(jì)算出樣品中大鼠ICAM-1/CD54濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒,包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè),可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單:
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱(chēng)
包裝
PI495-1
大鼠ICAM-1/CD54抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PI495-2
樣品分析緩沖液
5ml
PI495-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(5X)
20ml
PI495-4
大鼠ICAM-1/CD54標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PI495-5
大鼠ICAM-1/CD54生物素化抗體
10ml
PI495-6
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PI495-7
洗滌液(20X)
30ml
PI495-8
TMB溶液
10ml
PI495-9
終止液
5ml
PI495-10
封板膜(透明)
2張
PI495-11
封板膜(白色)
2張
–
說(shuō)明書(shū)
1份
保存條件:
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存,1-2周內(nèi)有效,-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效;試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外,試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng):
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉,在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn),所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶,如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶,請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性,標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后,如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬,否則容易失效。
加樣時(shí),請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭,一方面避免交叉污染,另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試,所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分,即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí),請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑,請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱(chēng)的組分。
充分混勻?qū)ΡWC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要,在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板,以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行,要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要,洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔,以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。