產(chǎn)品編號(hào)
PG357
Human/Mouse/Rat Glucagon ELISA Kit
96次
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的Human/Mouse/Rat Glucagon ELISA Kit (Human/Mouse/Rat Glucagon Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人/小鼠/大鼠胰高血糖素酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人、小鼠和大鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的Glucagon的ELISA試劑盒。本試劑盒適用于小鼠、大鼠和人等多種哺乳動(dòng)物Glucagon的檢測(cè)。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為20.8pg/ml，與人BDNF、β-NGF、NT-3
、NT-4、CNTF等均沒(méi)有交叉反應(yīng)，與大鼠胰高血糖素有35%的交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
胰高血糖素(Glucagon)是由胰腺產(chǎn)生的具有29個(gè)氨基酸的多肽，在葡萄糖代謝和維持血糖平衡過(guò)程中具有重要作用。胰高血糖素前體mRNA主要表達(dá)在胰島α細(xì)胞、小腸L細(xì)胞和大腦內(nèi)。胰島α細(xì)胞表達(dá)激素原轉(zhuǎn)化酶PC2，又稱(chēng)PCSK2，這是產(chǎn)生胰高血糖素所必須的酶。而在小腸L細(xì)胞中則表達(dá)激素原轉(zhuǎn)化酶PC1，該酶能夠加工前體胰高血糖素產(chǎn)生腸高血糖素和胃泌酸調(diào)節(jié)素。L細(xì)胞還能產(chǎn)生兩種胰高血糖素樣多肽，GLP-1和GLP-2，它們同樣來(lái)源于胰高血糖素前體，并且同樣能夠影響葡萄糖代謝，但是與胰高血糖素不具有任何序列相似性。胰高血糖素在不同物種間具有高度保守性，在人、小鼠、大鼠、豬、狗、馬等多種物種中均具有一致的氨基酸序列。
在正常的代謝過(guò)程中，胰高血糖素的分泌受到體內(nèi)血糖水平影響，當(dāng)血糖濃度過(guò)低時(shí)，胰高血糖素分泌會(huì)增加；而當(dāng)出現(xiàn)血糖濃度升高時(shí)，胰高血糖素的分泌則會(huì)減少。盡管胰高血糖素的結(jié)合位點(diǎn)在肝臟、腦、胰腺、腎、小腸和脂肪組織中均有表達(dá)，但其發(fā)揮活性主要還是在肝臟中。胰高血糖素能夠刺激糖原異生和肝糖原分解，從而增加血糖水平。胰高血糖素的分泌受到激素和神經(jīng)傳導(dǎo)物質(zhì)的調(diào)控，游離葡萄糖濃度也能影響其分泌。胰島素在一定程度上能夠降低胰高血糖素的分泌，GABA和GLP-1也能減少胰高血糖素的分泌，然而一些L-谷氨酸、精氨酸和胰高血糖素本身則能夠增加其分泌。
與胰島素相同，在II型糖尿病患者中胰高血糖素的表達(dá)也會(huì)出現(xiàn)異常，并且會(huì)加重病情。在游離葡萄糖處于較高濃度時(shí)，胰島素對(duì)胰高血糖素分泌的抑制作用減弱，從而引起胰高血糖素血癥，增加了高血糖癥的風(fēng)險(xiǎn)。瘦素能夠抑制胰高血糖素的分泌，刺激β細(xì)胞分泌更多的胰島素，但是胰高血糖素能夠減弱瘦素介導(dǎo)的胰島素的分泌。胰島α細(xì)胞還能表達(dá)一種胃饑餓素受體，當(dāng)與胃饑餓素作用后會(huì)增加胰高血糖素的分泌。另外，糖皮質(zhì)激素也能夠根據(jù)血糖濃度對(duì)胰高血糖素和胰島素的分泌進(jìn)行調(diào)節(jié)。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測(cè)樣品中Glucagon的濃度，其原理見(jiàn)圖1。Glucagon特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的Glucagon會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗Glucagon抗體后，生物素化抗Glucagon抗體與Glucagon結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。Glucagon濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中Glucagon濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱(chēng)
包裝
PG357-1
Glucagon抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PG357-2
樣品分析緩沖液
5ml
PG357-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
PG357-4
Glucagon標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PG357-5
Glucagon生物素化抗體
10ml
PG357-6
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PG357-7
洗滌液(20X)
30ml
PG357-8
TMB溶液
10ml
PG357-9
終止液
5ml
PG357-10
封板膜(透明)
2張
PG357-11
封板膜(白色)
2張
–
說(shuō)明書(shū)
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其他組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱(chēng)的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。