Human/Mouse/Rat HMGB1 ELISA Kit

發(fā)表于由

產(chǎn)品編號

PH406
Human/Mouse/Rat HMGB1 ELISA Kit
96次

3396

的Human/Mouse/Rat HMGB1 ELISA Kit (Human/Mouse/Rat HMGB1 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人/小鼠/大鼠高遷移率族蛋白1酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人/小鼠/大鼠血清或血漿中的HMGB1的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為0.8ng/ml，與人的HMGB-2由12.7%的交叉反應(yīng)性，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
人高遷移率族蛋白1(HMGB1)是一種分布廣泛的高度保守的非組蛋白的核DNA結(jié)合蛋白，分子量為30kDa。高遷移率族蛋白(high mobility group, HMG)因其在聚丙烯酰胺凝膠電泳中遷移率快而得名。HMG包括3個家族：HMGA、HMGB、HMGN，而HMGB家族有三個成員：分別為HMGB1、HMGB2、HMGB3。HMGB1高度保守，人和嚙齒動物的氨基酸序列同源性高達(dá)95%以上。人HMGB1含219個氨基酸，N端富含帶正電荷的賴氨酸，高度保守C端富含帶負(fù)電荷的天門冬氨酸、谷氨酸。HMGB1分布廣泛，可存在于細(xì)胞核、細(xì)胞漿和細(xì)胞外。胞核HMGB1主要和DNA結(jié)合起“DNA伴侶”的作用。它能廣泛與特定結(jié)構(gòu)的染色質(zhì)DNA結(jié)合而調(diào)節(jié)細(xì)胞復(fù)制轉(zhuǎn)錄、DNA修復(fù)等。膜相關(guān)HMGB1通過與晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(Receptor for Advanced Glycation End-Products, RAGE)高親和力配體結(jié)合，參與神經(jīng)元的生長、發(fā)育、軸突的外向生長、腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移、纖溶酶原的活化等。細(xì)胞外HMGB1作為晚期炎癥介質(zhì)參與各種急性炎癥反應(yīng)。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中人/小鼠/大鼠HMGB1的濃度，其原理見圖1。HMGB1特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的HMGB1會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入辣根過氧化物酶標(biāo)記抗HMGB1抗體后，辣根過氧化物酶標(biāo)記抗HMGB1抗體與HMGB1結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。HMGB1濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度。

圖1.雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：

產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝

PH406-1
HMGB1抗體預(yù)包被板
8孔×12條

PH406-2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml

PH406-3
HMGB1標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶

PH406-4
辣根過氧化物酶標(biāo)記HMGB1抗體
10ml

PH406-5
洗滌液(20X)
30ml

PH406-6
TMB溶液
10ml

PH406-7
終止液
5ml

PH406-8
封板膜(透明)
2張

PH406-9
封板膜(白色)
2張

—
說明書
1份

保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。