產(chǎn)品編號(hào)
PV951
Mouse VCAM-1/CD106 ELISA Kit
96次
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的Mouse?VCAM-1/CD106?ELISA?Kit?(Mouse?Vascular?Cell?Adhesion?Molecule-1?Enzyme-Linked?
ImmunoSorbent?Assay?Kit)，即小鼠血管細(xì)胞粘附分子-1酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的VCAM-1/CD106的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為45.8pg/ml，與小鼠E-Selectin、ICAM-1
、L-Selectin、P-Selectin，人VCAM-1等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
血管細(xì)胞粘附分子(Vascular Cell Adhesion Molecule-1, VCAM-1)，又稱CD106，是一種I型跨膜糖蛋白，屬于細(xì)胞粘附分子中免疫球蛋白亞族。通過選擇性剪切，小鼠VCAM-1至少具有兩種剪切變體。長(zhǎng)VCAM-1亞型分子量為110kDa，胞外域包含674個(gè)氨基酸，能夠形成7個(gè)C2型免疫球蛋白區(qū)域，跨膜區(qū)和胞內(nèi)域的氨基酸長(zhǎng)度分別為22和19。短VCAM-1亞型分子量為45kDa，屬于糖基磷脂酰肌醇結(jié)合膜蛋白。無論是跨膜VCAM-1還是膜綁定VCAM-1都能夠被分泌得到游離形式的VCAM-1，并且在血液和細(xì)胞培養(yǎng)上清液中均能檢測(cè)到游離VCAM-1的存在。小鼠VCAM-1具有一定的種間交叉反應(yīng)性，小鼠長(zhǎng)VCAM-1亞型與大鼠和人VCAM-1分別具有86%和74%的氨基酸同源性。三種VCAM-1胞質(zhì)域氨基酸序列完全相同。
VCAM-1主要表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞，炎性物質(zhì)刺激會(huì)誘導(dǎo)其表達(dá)。同時(shí)在一些非血管細(xì)胞中VCAM-1也有表達(dá)，例如樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、骨髓來源基質(zhì)細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、間皮細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞和胚胎成肌細(xì)胞等。VCAM-1能夠招募淋巴細(xì)胞到達(dá)炎癥部位，并且能夠促進(jìn)淋巴細(xì)胞外滲。表達(dá)在骨髓內(nèi)皮細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞表面的VCAM-1能夠調(diào)節(jié)T細(xì)胞和B細(xì)胞的發(fā)育過程。VCAM-1還能調(diào)節(jié)黑色素瘤細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞之間的粘附作用，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。游離形式的VCAM-1能夠調(diào)節(jié)血管新生，并且對(duì)T淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞具有一定的趨化作用。VCAM-1和整合素的相互作用會(huì)促進(jìn)部分病理狀態(tài)的發(fā)展，例如動(dòng)脈粥樣硬化、風(fēng)濕、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎癥性腸病和移植排斥反應(yīng)等。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測(cè)樣品中小鼠VCAM-1/CD106的濃度，其原理見圖1。小鼠VCAM-1/CD106特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的小鼠VCAM-1/CD106會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗小鼠VCAM-1/CD106抗體后，生物素化抗小鼠VCAM-1/CD106抗體與小鼠VCAM-1/CD106結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會(huì)催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。小鼠VCAM-1/CD106濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中小鼠VCAM-1/CD106濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
PV951-1
小鼠VCAM-1/CD106抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PV951-2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(5X)
20ml
PV951-3
小鼠VCAM-1/CD106標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PV951-4
小鼠VCAM-1/CD106生物素化抗體
10ml
PV951-5
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PV951-6
洗滌液(20X)
30ml
PV951-7
TMB溶液
10ml
PV951-8
終止液
5ml
PV951-9
封板膜(透明)
2張
PV951-10
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
?保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
?注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。