產品編號
PV951
Mouse VCAM-1/CD106 ELISA Kit
96次
3198
的Mouse?VCAM-1/CD106?ELISA?Kit?(Mouse?Vascular?Cell?Adhesion?Molecule-1?Enzyme-Linked?
ImmunoSorbent?Assay?Kit)，即小鼠血管細胞粘附分子-1酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的VCAM-1/CD106的ELISA試劑盒。
本產品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結果表明，最小檢出量為45.8pg/ml，與小鼠E-Selectin、ICAM-1
、L-Selectin、P-Selectin，人VCAM-1等均沒有交叉反應，板內、板間變異系數(shù)均小于10%。
血管細胞粘附分子(Vascular Cell Adhesion Molecule-1, VCAM-1)，又稱CD106，是一種I型跨膜糖蛋白，屬于細胞粘附分子中免疫球蛋白亞族。通過選擇性剪切，小鼠VCAM-1至少具有兩種剪切變體。長VCAM-1亞型分子量為110kDa，胞外域包含674個氨基酸，能夠形成7個C2型免疫球蛋白區(qū)域，跨膜區(qū)和胞內域的氨基酸長度分別為22和19。短VCAM-1亞型分子量為45kDa，屬于糖基磷脂酰肌醇結合膜蛋白。無論是跨膜VCAM-1還是膜綁定VCAM-1都能夠被分泌得到游離形式的VCAM-1，并且在血液和細胞培養(yǎng)上清液中均能檢測到游離VCAM-1的存在。小鼠VCAM-1具有一定的種間交叉反應性，小鼠長VCAM-1亞型與大鼠和人VCAM-1分別具有86%和74%的氨基酸同源性。三種VCAM-1胞質域氨基酸序列完全相同。
VCAM-1主要表達在血管內皮細胞，炎性物質刺激會誘導其表達。同時在一些非血管細胞中VCAM-1也有表達，例如樹突狀細胞、巨噬細胞、成纖維細胞、平滑肌細胞、骨髓來源基質細胞、軟骨細胞、間皮細胞、腎小管上皮細胞和胚胎成肌細胞等。VCAM-1能夠招募淋巴細胞到達炎癥部位，并且能夠促進淋巴細胞外滲。表達在骨髓內皮細胞和基質細胞表面的VCAM-1能夠調節(jié)T細胞和B細胞的發(fā)育過程。VCAM-1還能調節(jié)黑色素瘤細胞和內皮細胞之間的粘附作用，從而促進腫瘤細胞轉移。游離形式的VCAM-1能夠調節(jié)血管新生，并且對T淋巴細胞和單核細胞具有一定的趨化作用。VCAM-1和整合素的相互作用會促進部分病理狀態(tài)的發(fā)展，例如動脈粥樣硬化、風濕、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、炎癥性腸病和移植排斥反應等。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測樣品中小鼠VCAM-1/CD106的濃度，其原理見圖1。小鼠VCAM-1/CD106特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的小鼠VCAM-1/CD106會與捕獲抗體結合。當加入生物素化的抗小鼠VCAM-1/CD106抗體后，生物素化抗小鼠VCAM-1/CD106抗體與小鼠VCAM-1/CD106結合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。小鼠VCAM-1/CD106濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中小鼠VCAM-1/CD106濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產品編號
產品名稱
包裝
PV951-1
小鼠VCAM-1/CD106抗體預包被板
8孔×12條
PV951-2
標準品稀釋液(5X)
20ml
PV951-3
小鼠VCAM-1/CD106標準品
2-4瓶
PV951-4
小鼠VCAM-1/CD106生物素化抗體
10ml
PV951-5
辣根過氧化物酶標記Streptavidin
10ml
PV951-6
洗滌液(20X)
30ml
PV951-7
TMB溶液
10ml
PV951-8
終止液
5ml
PV951-9
封板膜(透明)
2張
PV951-10
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
?保存條件：
標準品4℃保存，1-2周內有效，-20℃保存6個月內有效；試劑盒其它組分4℃保存6個月內有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
?注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結晶，如果發(fā)現(xiàn)有結晶，請室溫水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻對保證反應結果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產生。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。