產品編號
PC125
Mouse CCL2/JE/MCP-1 ELISA Kit
96次
2798
的Mouse?CCL2/JE/MCP-1?ELISA?Kit?(Mouse?Monocyte?Chemoattractant?Protein1?Enzyme-Linked?
ImmunoSorbent?Assay?Kit)，即小鼠單核細胞趨化蛋白1酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿、或細胞培養(yǎng)上清液中的MCP-1的ELISA試劑盒。
本產品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結果表明，最小檢出量為16.2pg/ml，與小鼠MCP-2、MCP-3、MCP-4、人MCP-1、MCP-5、MARC等均沒有交叉反應，板內、板間變異系數(shù)均小于10%。
小鼠JE基因最初被認為是小鼠成纖維細胞中血小板來源的生長因子誘導基因。JE基因所編碼的蛋白都屬于炎性細胞因子或免疫調節(jié)細胞因子，屬于CC趨化因子家族。在所有CC趨化因子家族成員中，JE在結構上和功能上都與MCP/eotaxin具有一定相關性。在MCP/eotaxin亞族中，已經發(fā)現(xiàn)的成員有人MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4和eotaxin以及小鼠JE/MCP-1、MCP-3/MARC、MCP-5和eotaxin。成熟的人MCP-1與小鼠JE、MARC、MCP-5分別具有55%、59%和66%的氨基酸同源性。
單核細胞趨化蛋白(Monocyte?Chemoattractant?Protein?1, MCP-1)，也被稱為單核細胞趨化與激活因子(Monocyte Chemotactic and Activating Factor, MCAF)。小鼠MCP-1 cDNA編碼產生148個氨基酸的前體蛋白，經剪切掉23個氨基酸的信號肽后得到成熟的小鼠MCP-1。與人MCP-1相比，小鼠MCP-1具有49個氨基酸的羧基端延伸，主要由絲氨酸和蘇氨酸構成，MCP-1的羧基端被證實并非MCP-1發(fā)揮活性所必需。除了成纖維細胞、星形膠質細胞和上皮細胞外，小鼠MCP-1在巨噬細胞、肥大細胞、內皮細胞、成骨細胞和成釉質細胞上也有所表達。小鼠MCP-1的表達主要受到炎性刺激因子和TNF-α、IL-1、IFN-γ和PDGF等細胞因子的影響。
小鼠MCP-1是一種有效的單核細胞，巨噬細胞和淋巴細胞化學引誘物。MCP-1能夠調節(jié)Th1/Th2淋巴細胞分化，通過刺激IL-4的產生從而抑制IL-2分泌，促進Th2細胞生成。G蛋白偶聯(lián)受體CCR2參與調節(jié)MCP-1的活性，小鼠CCR2?cDNA編碼產生373個氨基酸長度的蛋白，與人MCP-1受體CCR2B具有80%的氨基酸同源性。單核細胞和巨噬細胞表面表達大量的CCR2。
MCP-1與受體結合后能夠通過活化Smad3和JP42/44?MAPK及PI3K/AKT通路影響腫瘤細胞的遷移和存活，還能夠影響ERK1/ERK2/JNK-AP1和NF-κB信號通路發(fā)揮作用。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測樣品中小鼠MCP-1的濃度，其原理見圖1。小鼠MCP-1特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的小鼠MCP-1會與捕獲抗體結合。當加入生物素化的抗小鼠MCP-1抗體后，生物素化抗小鼠MCP-1抗體與小鼠MCP-1結合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。小鼠MCP-1濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中小鼠MCP-1濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產品編號
產品名稱
包裝
PC125-1
小鼠CCL2/JE/MCP-1抗體預包被板
8孔×12條
PC125-2
樣品分析緩沖液
5ml
PC125-3
標準品稀釋液
10ml
PC125-4
小鼠CCL2/JE/MCP-1標準品
2-4瓶
PC125-5
小鼠CCL2/JE/MCP-1生物素化抗體
10ml
PC125-6
辣根過氧化物酶標記Streptavidin
10ml
PC125-7
洗滌液(20X)
30ml
PC125-8
TMB溶液
10ml
PC125-9
終止液
5ml
PC125-10
封板膜(透明)
2張
PC125-11
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
標準品4℃保存，1-2周內有效，-20℃保存6個月內有效；試劑盒其它組分4℃保存6個月內有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結晶，如果發(fā)現(xiàn)有結晶，請室溫水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻對保證反應結果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產生。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。