產(chǎn)品編號
PC115
Human CCL11/Eotaxin ELISA Kit
96次
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的Human?CCL11/Eotaxin?ELISA?Kit?(Human?CCL11/Eotaxin?Enzyme-Linked?ImmunoSorbent Assay Kit)，即人嗜酸性粒細胞趨化因子酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的CCL11/Eotaxin的ELISA試劑盒。
ImmunoSorbent?Assay?Kit)，即小鼠單核細胞趨化蛋白1酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿、或細胞培養(yǎng)上清液中的MCP-1的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結果表明，最小檢出量為12.6pg/ml，與人的MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、 RANTES及小鼠的Eotaxin等均沒有交叉反應，板內、板間變異系數(shù)均小于10%。
人嗜酸性粒細胞趨化因子(Eotaxin)，又稱CCL11 (Chemokine C-C motif Ligand 11)，是一種分子量為8.3kDa、含有74個氨基酸的非糖基化多肽，屬于CC細胞因子家族。人Eotaxin具有一定的種間交叉反應性，與小鼠和豚鼠具有60%的氨基酸同源性。與其它CC家族細胞因子相比，Eotaxin與MCP-1具有66%的氨基酸同源性，與MCP-4具有58%的氨基酸同源性，與Eotaxin-2僅有39%的氨基酸同源性。炎性細胞因子IL-1、TNF-α和IFN-γ能夠誘導Eotaxin產(chǎn)生。能夠產(chǎn)生Eotaxin的細胞有許多類型，例如內皮細胞、成纖維細胞、巨噬細胞、支氣管上皮細胞、平滑肌細胞、軟骨細胞和嗜酸性粒細胞等。
在炎性和過敏反應中，Eotaxin是嗜酸性粒細胞有效的選擇性化學誘導物，CCR3受體參與調節(jié)Eotaxin活性。CCR3分子量在45-55kDa，含有355個氨基酸，具有7次跨膜結構。盡管CCR3是目前已知的Eotaxin唯一受體，但其它細胞因子例如Eotaxin-2、MCP-4、MCP-3、Leukotactin-1和RANTES也能與CCR3結合，只是親和力有所不同。pH和離子強度的改變會影響Eotaxin和CCR3的結合，這表明組織微環(huán)境中的細微變化可能是調控Eotaxin生物學效應的機制之一。表達CCR3的細胞主要嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞和Th2輔助T細胞。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測樣品中人CCL11/Eotaxin的濃度，其原理見圖1。人CCL11/Eotaxin特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的人CCL11/Eotaxin會與捕獲抗體結合。當加入生物素化的抗人CCL11/Eotaxin抗體后，生物素化抗人CCL11/Eotaxin抗體與人CCL11/Eotaxin結合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。人CCL11/Eotaxin濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中人CCL11/Eotaxin濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
PC115-1
人CCL11/Eotaxin抗體預包被板
8孔×12條
PC115-2
樣品分析緩沖液
5ml
PC115-3
標準品稀釋液
10ml
PC115-4
人CCL11/Eotaxin標準品
2-4瓶
PC115-5
人CCL11/Eotaxin生物素化抗體
10ml
PC115-6
辣根過氧化物酶標記Streptavidin
10ml
PC115-7
洗滌液(20X)
30ml
PC115-8
TMB溶液
10ml
PC115-9
終止液
5ml
PC115-10
封板膜(透明)
2張
PC115-11
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
標準品4℃保存，1-2周內有效，-20℃保存6個月內有效；試劑盒其它組分4℃保存6個月內有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結晶，如果發(fā)現(xiàn)有結晶，請室溫水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻對保證反應結果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。