產(chǎn)品編號
PC115
Human CCL11/Eotaxin ELISA Kit
96次
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的Human?CCL11/Eotaxin?ELISA?Kit?(Human?CCL11/Eotaxin?Enzyme-Linked?ImmunoSorbent Assay Kit)，即人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的CCL11/Eotaxin的ELISA試劑盒。
ImmunoSorbent?Assay?Kit)，即小鼠單核細(xì)胞趨化蛋白1酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿、或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的MCP-1的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為12.6pg/ml，與人的MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、 RANTES及小鼠的Eotaxin等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
人嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(Eotaxin)，又稱CCL11 (Chemokine C-C motif Ligand 11)，是一種分子量為8.3kDa、含有74個氨基酸的非糖基化多肽，屬于CC細(xì)胞因子家族。人Eotaxin具有一定的種間交叉反應(yīng)性，與小鼠和豚鼠具有60%的氨基酸同源性。與其它CC家族細(xì)胞因子相比，Eotaxin與MCP-1具有66%的氨基酸同源性，與MCP-4具有58%的氨基酸同源性，與Eotaxin-2僅有39%的氨基酸同源性。炎性細(xì)胞因子IL-1、TNF-α和IFN-γ能夠誘導(dǎo)Eotaxin產(chǎn)生。能夠產(chǎn)生Eotaxin的細(xì)胞有許多類型，例如內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、軟骨細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞等。
在炎性和過敏反應(yīng)中，Eotaxin是嗜酸性粒細(xì)胞有效的選擇性化學(xué)誘導(dǎo)物，CCR3受體參與調(diào)節(jié)Eotaxin活性。CCR3分子量在45-55kDa，含有355個氨基酸，具有7次跨膜結(jié)構(gòu)。盡管CCR3是目前已知的Eotaxin唯一受體，但其它細(xì)胞因子例如Eotaxin-2、MCP-4、MCP-3、Leukotactin-1和RANTES也能與CCR3結(jié)合，只是親和力有所不同。pH和離子強(qiáng)度的改變會影響Eotaxin和CCR3的結(jié)合，這表明組織微環(huán)境中的細(xì)微變化可能是調(diào)控Eotaxin生物學(xué)效應(yīng)的機(jī)制之一。表達(dá)CCR3的細(xì)胞主要嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和Th2輔助T細(xì)胞。
??????本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測樣品中人CCL11/Eotaxin的濃度，其原理見圖1。人CCL11/Eotaxin特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的人CCL11/Eotaxin會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人CCL11/Eotaxin抗體后，生物素化抗人CCL11/Eotaxin抗體與人CCL11/Eotaxin結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。人CCL11/Eotaxin濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中人CCL11/Eotaxin濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
PC115-1
人CCL11/Eotaxin抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PC115-2
樣品分析緩沖液
5ml
PC115-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
PC115-4
人CCL11/Eotaxin標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PC115-5
人CCL11/Eotaxin生物素化抗體
10ml
PC115-6
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PC115-7
洗滌液(20X)
30ml
PC115-8
TMB溶液
10ml
PC115-9
終止液
5ml
PC115-10
封板膜(透明)
2張
PC115-11
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。