產(chǎn)品編號(hào)
PC145
Human CCL3/MIP-1α ELISA Kit
96次
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的Human?CCL3/MIP-1α?ELISA?Kit?(Human?Macrophage?Inflammatory?Protein-1α?Enzyme-Linked?
ImmunoSorbent?Assay?Kit)，即人巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α2酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)人血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的CCL3/MIP-1α的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為4.6pg/ml，與MCP-1、EGF、ENA-78、G-CSF、GM-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-6、小鼠CCL3等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
巨噬細(xì)胞炎性蛋白(Macrophage Inflammatory Protein-1, MIP-1α)，又稱CCL3 (Chemokine C-C motif Ligand 3)，屬于CC趨化因子亞族。人MIP-1α的cDNA編碼產(chǎn)生92個(gè)氨基酸的前體蛋白，其中具有22個(gè)氨基酸的信號(hào)肽，經(jīng)蛋白酶水解后得到分泌型的成熟MIP-1α?；罨腡細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞、肥大細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞均能產(chǎn)生MIP-1α。
與其它CC趨化因子相同，MIP-1α對(duì)單核細(xì)胞也具有化學(xué)趨化作用。另外，MIP-1α對(duì)T淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、細(xì)胞毒性T細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞也有一定的化學(xué)趨化作用。MIP-1α還能夠作為肝細(xì)胞抑制劑，抑制造血祖細(xì)胞的增殖。CD8+T細(xì)胞所產(chǎn)生的MIP-1α、MIP-1β和RANTES均被認(rèn)為是重要的HIV抑制因子。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中人CCL3/MIP-1α的濃度，其原理見圖1。人CCL3/MIP-1α特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的人CCL3/MIP-1α?xí)c捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人CCL3/MIP-1α抗體后，生物素化抗人CCL3/MIP-1α抗體與人CCL3/MIP-1α結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會(huì)催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。人CCL3/MIP-1α濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中人CCL3/MIP-1α濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
PC145-1
人CCL3/MIP-1α抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PC145-2
樣品分析緩沖液
5ml
PC145-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(5X)
10ml
PC145-4
人CCL3/MIP-1α標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PC145-5
人CCL3/MIP-1α生物素化抗體
10ml
PC145-6
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PC145-7
洗滌液(20X)
30ml
PC145-8
TMB溶液
10ml
PC145-9
終止液
5ml
PC145-10
封板膜(透明)
2張
PC145-11
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。