產(chǎn)品編號
JJP51
Human IL-2 ELISA Kit (High-sensitive)
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生產(chǎn)的Human IL-2ELISA Kit(Human Interleukin-2Enzyme-Linked ImmunoSorbent AssayKit, High-sensitive)，即高敏型人白細胞介素2酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的IL-2的ELISA試劑盒，最小檢出量為5.8pg/ml。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為5.8pg/ml，與人IL-2sR、IL-2RFc Chimera，小鼠IL-2，大鼠IL-2等沒有交叉反應(yīng)。板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
IL-2即白細胞介素-2(簡稱白介素2)，也稱為T cell growth factor (TCGF)，是一種分子量約為15-18kDa的糖基化α螺旋多肽，屬于γc細胞因子家族，以單體形式存在，半衰期極短(<30min)。成熟的人IL-2是由153個氨基酸剪掉20個氨基酸的信號肽所剩余的133個氨基酸組成，成熟結(jié)構(gòu)域自然狀態(tài)下呈α螺旋結(jié)構(gòu)，翻譯后加工包括第三位Thr位點的O-糖基化和二硫鍵的形成。蛋白鏈中有三個半胱氨酸殘基(Cys)，位于第58、105和125位。58位和105位半胱氨酸殘基結(jié)合形成二硫鍵是蛋白具有活性的必備前提。成熟的人IL-2與犬、大鼠、貓和猴IL-2的氨基酸同源性分別達73%、66%、78%和97%。雖然人IL-2與小鼠IL-2的氨基酸同源性僅有60%，但是人IL-2可以激活小鼠細胞上的IL-2受體。γδ T細胞、活化的CD4+和CD8+ T細胞、神經(jīng)細胞、小神經(jīng)膠質(zhì)細胞和造血干細胞等均能夠分泌IL-2。
IL-2受體(IL-2R)是異源三聚體，由55kDa的CD25/IL-2 Rα鏈、70kDa的IL-2 Rβ和65kDa的γc鏈組成。IL-2首先與IL-2 Rα結(jié)合形成二元復(fù)合物，然后募集IL-2 Rβ和γc形成四聚體的信號復(fù)合物。除了IL-2，IL-2 Rβ同時也是IL-15四聚體信號復(fù)合物的組成部分，而γc是IL-4、IL-7、IL-9、IL-15和IL-21受體所共有的公共鏈。
IL-2在抗體刺激引起的不同反應(yīng)階段的T細胞，自然殺傷細胞和B細胞的細胞增殖方面起重要的作用，此外，IL-2還可調(diào)節(jié)γ干擾素、主要組織相容性抗原的表達，刺激活化的B細胞的增殖和分化，提高自然殺傷細胞的活性和抑制粒細胞/巨噬細胞的增殖。 IL-2還可誘導(dǎo)少膠突細胞的增殖和分化。
IL-2與其受體結(jié)合后通過磷酸化作用激活JAK-STAT信號通路，將信號傳遞至細胞核實現(xiàn)對目標基因的調(diào)控作用。此外，在Shc蛋白的作用下， IL-2還可以通過形成Grb2/SOS復(fù)合物實現(xiàn)對下游Ras/Raf/MEK/MAPK和PI3K/Akt/JP7S6K等多種信號通路的激活。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中人IL-2的濃度，其原理見圖1。人IL-2特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標板上，當(dāng)加入標準品或樣品時，其中的人IL-2會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗人IL-2抗體后，生物素化抗人IL-2抗體與人IL-2結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。人IL-2濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
JJP51-1
人IL-2抗體預(yù)包被板
8孔×12條
JJP51-2
樣本分析緩沖液
5ml
JJP51-3
標準品稀釋液
10ml
JJP51-4
人IL-2標準品
2-4瓶
JJP51-5
人IL-2生物素化抗體
10ml
JJP51-6
辣根過氧化物酶標記Streptavidin
10ml
JJP51-7
洗滌液(20X)
30ml
JJP51-8
TMB溶液
10ml
JJP51-9
終止液
5ml
JJP51-10
封板膜(透明)
2張
JJP51-11
封板膜(白色)
2張
—
說明書
1份
保存條件：
標準品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。