產(chǎn)品編號
PV957
Mouse VEGF ELISA Kit
96次
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的Mouse VEGF ELISA Kit (Mouse Vascular Endothelial Growth Factor Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠血管內(nèi)皮生長因子酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的VEGF的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為6.7pg/ml，與人VEGF121、VEGF165、PLGF等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
血管內(nèi)皮生長因子(Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF或VEGF-A)，又稱血管通透因子(Vascular Permeability Factor, VPF)，是調(diào)控胎兒和成人血管生成的重要調(diào)節(jié)因子。VEGF屬于血小板源性生長因子(Platelet Derived Growth Factor, PDGF)家族，結(jié)構(gòu)上具有8個保守的半胱氨酸殘基，并通過二硫鍵形成反向平行的二聚體。小鼠體內(nèi)存在長度分別為120、164和188個氨基酸長度的VEGF異構(gòu)體，人體內(nèi)的VEGF主要有氨基酸長度分別為121、145、165、183、189和206這幾種亞型，其中VEGF165在人體內(nèi)含量最多且活性最強，其次是VEGF121和VEGF189。小鼠VEGF164與大鼠相應(yīng)的VEGF具有97%的氨基酸同源性，與人和豬的VEGF具有89%的氨基酸同源性，與牛VEGF具有88%氨基酸同源性，與貓、馬和犬VEGF具有90%的氨基酸同源性。VEGF在多種細(xì)胞和組織中均有表達，例如骨骼肌和心肌組織、肝細(xì)胞、成骨細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、褐色脂肪組織、CD34+干細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞等。缺氧或在IL-1、IL-6、IL-8和TNF-α等其他細(xì)胞因子刺激下，上述這些組織和細(xì)胞就會表達VEGF。。
VEGF主要參與血管生成過程。在胚胎形成時期，VEGF調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和存活，從而調(diào)節(jié)血管密度，但并不能調(diào)節(jié)所形成血管的類型。通過招募成骨細(xì)胞和成軟骨細(xì)胞，VEGF還能促進骨生成，同時VEGF還是單核細(xì)胞的化學(xué)引誘物。在嬰兒體內(nèi)，VEGF能夠維持內(nèi)皮細(xì)胞完整性，同時還是血管內(nèi)皮細(xì)胞的促細(xì)胞分裂素。在成人體內(nèi)，VEGF主要在傷口恢復(fù)和女性的生殖周期中發(fā)揮作用。在病變組織中，VEGF能夠提高血管通透性，因此VEGF被認(rèn)為能夠通過促進腫瘤部位血管新生從而促進腫瘤轉(zhuǎn)移。游離的VEGF水平被認(rèn)為與部分自身免疫疾病狀況相關(guān)。
VEGF二聚體與兩個受體酪氨酸激酶結(jié)合，VEGF R1(Flt-1)和VEGF R2(Flk-1/KDR)，隨后誘導(dǎo)二者的同源二聚化和自身磷酸化。受體主要表達在血管內(nèi)皮細(xì)胞和一些非內(nèi)皮細(xì)胞上，盡管VEGF R1對VEGF的親和力更高，但VEGF R2才是VEGF發(fā)揮活性的主要調(diào)節(jié)受體。VEGF與受體結(jié)合后，能夠激活Ras/MAPK、FAK/paxillin及PI3K/AKT等信號通路調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、基因表達及血管通透性等。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中小鼠VEGF的濃度，其原理見圖1。小鼠VEGF特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的小鼠VEGF會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗小鼠VEGF抗體后，生物素化抗小鼠VEGF抗體與小鼠VEGF結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。小鼠VEGF濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中小鼠VEGF濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
PV957-1
小鼠VEGF抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PV957-2
樣品分析緩沖液
5ml
PV957-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
PV957-4
小鼠VEGF標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PV957-5
小鼠VEGF生物素化抗體
10ml
PV957-6
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PV957-7
洗滌液(20X)
30ml
PV957-8
TMB溶液
10ml
PV957-9
終止液
5ml
PV957-10
封板膜(透明)
2張
PV957-11
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
??????標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項：
??????由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
??????洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
??????為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
??????TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
??????加樣時，請注意每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
??????由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
??????充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
??????本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
??????洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
??????檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
??????加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。