wako 用于磷酸化蛋白的WB檢測– Phos-tag™ Biotin

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wako ?Phos-tag™ Biotin–生物素共軛的Phos-tag，用于磷酸化蛋白的WB檢測

Phos-tag™ Biotin是與生物素結(jié)合的Phos-tag™，可代替western blot檢測中的磷酸化抗體。Phos-tag™ Biotin BTL-104和BTL-105可靈敏檢測PVDF膜上的磷酸化蛋白。現(xiàn)推出液體型。

特點：

  • 無輻射
  • 無需PVDF膜的封閉處理
  • Phos-tag™的特異性結(jié)合與氨基酸種類、序列無關(guān)
  • 可適用于免疫印跡和質(zhì)譜分析等后續(xù)工作
  • Phos-tag™-BTL母液可穩(wěn)定保存至少6個月
  • 實驗流程與使用HRP標記抗體相類似
  • 可用于所有的磷酸化蛋白檢測
  • 與普通WB檢測相似。但無需使用磷酸化抗體
【Phos-tag™ Biotin免疫印跡原理】
應(yīng)用實例：

應(yīng)用實例：使用Phos-tag™BTL-104進行斑點印跡檢測
非磷酸化蛋白：Bovine Serum Albumin, Human Serum Albumin, Carbonic Anhydrase, β- Galactosidase
磷酸化蛋白：α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
去磷酸化蛋白： (用堿性磷酸酶處理) α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
Application (3): Western Blotting:
Phos-tag Biotin BTL-104 [Wako Cat. #301-93531 (10 mg)]? Protocol（點擊進入）

Phos-tag Biotin BTL-105 [Wako Cat. #304-93541 (10 mg)]? Protocol（點擊進入）
產(chǎn)品描述

1、粉末；

2、在4度可保存至少一年；

3、檢測磷酸化蛋白；

4、Phos-tagTM與生物素（Biotin）結(jié)合可與親和素標記的HRP結(jié)合，檢測磷酸化蛋白。

可用于免疫印跡實驗，二維電泳。

產(chǎn)品編號 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 原價
305-99411 Phos-tag™ Biotin BTL-104 1mM Aqueous 0.3ml 2700
308-97201 Phos-tag™ Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml 3560
301-93531 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg 12460
308-93541 Phos-tag™ Biotin BTL-105 10mg 12460

BTL-104、BTL-105、BTL-111三者連接鏈（Linher)長度不一，但使用上基本相同.BTL-111靈敏度最高，推薦使用溶解性比較高的BTL-104。

Wako ?Phos-tag™ Biotin–生物素共軛的Phos-tag使用的相關(guān)問題解答

Q. BTL-104，BTL-105，BTL-111 之間有什么區(qū)別？
A. BTL-104，BTL-105 和BTL-111 三者連接鏈(Linker) 的長度不同，但使用相同。BTL-111 靈敏度最高。

Q. 檢測靈敏度到什么水平？
A. 可以達到ng 級別。需要使用高發(fā)光試劑，比如ImmunoStar LD。

Q. 使用該產(chǎn)品時還需要別的試劑嗎？
A. 需要制備Streptavidin-conjugated HRP 溶液。

Q. Phos-tag ™ Biotin 可以使用多少次？
A. 主要決定于使用次數(shù)以及使用量，以下實驗次數(shù)僅作參考
BTL-104：130-1300 次；
BTL-105：113-1130 次；
BTL-111 1 mM 水溶液：10-100 次

Q. 可測定磷酸化蛋白嗎？
A. 根據(jù)條帶的濃度可以進行半定量分析。

Q. 能否確定結(jié)合磷酸基團的數(shù)目？
A. 不能。

Q. 能否剝除Phos-tag ™ Biotin 中的抗體？
A. 可以。與含有62.5 mM Tris-HCl（pH6.8）、2%(w/v) SDS
和1 M 2-mercaptoethanol 溶液混合后，振蕩15 分鐘。將混合液用1×TBS-T 漂洗3 次，每次10 分鐘。

Q. 推薦使用哪種膜？
A. 推薦使用PVDF 膜。

Q. 使用Phos-tag ™ Biotin 要求終止反應(yīng)嗎？
A. 不需要，因為終止反應(yīng)會降低靈敏度。

Reference ?參考文獻

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