wako LabAssay系列試劑盒–游離脂肪酸定量檢測(cè)試劑盒

LabAssay™ NEFA 游離脂肪酸定量檢測(cè)試劑盒
【摘要】
游離脂肪酸(NEFA)是脂肪細(xì)胞中的中性脂肪被分解后由血中被釋放出來的物質(zhì)，在血清中與白蛋白結(jié)合，被末梢組織搬運(yùn)，成為末梢組織重要的能源來源。
檢測(cè)游離脂肪酸的量，可用于調(diào)節(jié)由脂肪組織釋放到肝臟的物質(zhì)，有利于掌握類脂化合物代謝的動(dòng)態(tài)。
【檢測(cè)原理】
樣品中的游離脂肪酸(NEFA)在輔酶A與(CoA)腺嘌呤核苷-5′-三磷酸二鈉(ATP)的存在下，受酰基-CoA合成酶(ACS)作用，生成酰基-CoA、AMP及焦磷酸(PPi)。生成的?；?CoA在?；?CoA氧化酶(ACOD)的作用下被氧化，同時(shí)生成2,3-反式-烯酰-CoA及過氧化氫。生成的過氧化氫在過氧化物酶(POD)的作用下，與3-甲基-N-乙基-N- (β-羥乙基甲基)-苯胺(MEHA)及4-氨基安替比林發(fā)生定量性氧化縮合，生成青紫色色素。測(cè)量這個(gè)青紫色色素吸光值，即可計(jì)算出樣品中的NEFA濃度。
【特點(diǎn)】
?以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為對(duì)象的生物化學(xué)檢測(cè)試劑
?用微孔板檢測(cè)，可用少量樣品一次檢測(cè)多個(gè)樣品

LabAssay TM NEFA [ACS?ACOD法]
在血中游離脂肪酸(NEFA:Non-Esterified Fatty Acid)，與白蛋白結(jié)合，被末梢組織搬運(yùn)，成為末梢組織重要的能源來源。游離脂肪酸的濃度，可用于調(diào)節(jié)由脂肪組織釋放到肝臟的物質(zhì)，在末梢組織中的消耗。
本品可根據(jù)測(cè)量氧化縮合生成的青紫色色素的吸光值，檢測(cè)樣品中游離脂肪酸的量。
【特點(diǎn)】
?蒸餾水作為樣品時(shí)，吸光值在0.07以下。
?檢測(cè)已知濃度血清樣品時(shí)，濃度為已知濃度±15%以內(nèi)。
【檢測(cè)波長(zhǎng)】波長(zhǎng):550nm
【試劑盒組成】
顯色劑A…10ml用×6瓶 ,
顯色劑A溶解液…65ml×1瓶 ,
顯色劑B…20ml用×6瓶,
顯色劑B溶解液 …130ml×1瓶,
標(biāo)準(zhǔn)液(油酸 1mEq/l)…10ml×1瓶

【使用方法】
【試劑的配制】
顯色試劑A:
1瓶顯色劑A(10ml用)溶解于10ml顯色劑A溶解液中，得到顯色試劑A。
顯色試劑B:
1瓶顯色劑B(20ml用) 溶解于20ml顯色劑B溶解液中，得到顯色試劑B。
標(biāo)準(zhǔn)液:
附帶的標(biāo)準(zhǔn)液可直接使用，也可經(jīng)稀釋作為標(biāo)準(zhǔn)系列使用。
【標(biāo)準(zhǔn)操作法】
向微孔板內(nèi)添加4μl樣品和80μl顯色試劑A，充分混合，在37℃加熱10分鐘。加入160μl顯色試劑B，在37℃加熱10分鐘。以此作為對(duì)照空白值，測(cè)量樣品及標(biāo)準(zhǔn)液的吸光值。
【檢測(cè)波長(zhǎng)】
550nm (進(jìn)行雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，主波長(zhǎng)為546nm,副波長(zhǎng)為660nm)

LabAssay™ ALP Alkaline Phosphatase Assay Kit 堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒
【摘要】
堿性磷酸酶的活性檢測(cè)試劑盒。常用于檢測(cè)培養(yǎng)的成骨細(xì)胞、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物血清和骨組織中的堿性磷酸酶活性。
堿性磷酸酶(ALP)廣泛分布于肝臟、骨、小腸之中。特別在骨代謝研究領(lǐng)域方面被用作為骨形成指標(biāo)之一。本品是用p–硝基苯磷酸作為底物的堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒，利用微孔板，可進(jìn)行多種樣品的檢測(cè)。
【檢測(cè)原理】
樣品在含有p-硝基苯磷酸的碳酸鹽緩沖液(pH9.8)中反應(yīng)，在樣品中的堿性磷酸酶作用下，p-硝基苯磷酸分解為p-硝基酚和磷酸。生成的p-硝基酚為堿性，呈黃色。根據(jù)測(cè)量其405nm的吸光值，計(jì)算出樣品中堿性磷酸酶的活性。

LabAssay TM ALP? [p-硝基苯磷酸基質(zhì)法]
【性能】
檢測(cè)范圍：>0.06 mmol/L
標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍：0～0.5 mmol/L
再現(xiàn)性：C.V.<10%
【試劑盒組成】
底物———————20片（溶解時(shí)：p-硝基苯磷酸二鈉 6.7mmol/L)
底物溶解液——-100ml×1瓶（2.0mmol/L氯化鎂含有0.1mol/L碳酸鹽緩沖液pH9.8)
反應(yīng)終止液——-100ml×1瓶（0.2mol/L氫氧化鈉溶液）
標(biāo)準(zhǔn)液—————10ml×1瓶（0.5mmol/L p-硝基酚溶液）
【試劑的配制】
1）底物緩沖液：1片底物溶解于5mL底物溶解液中。
2）反應(yīng)終止液：直接使用。
3）系列稀釋標(biāo)準(zhǔn)液：將標(biāo)準(zhǔn)液用蒸餾水依次稀釋為0.5、0.25、0.125、0.0625 mmol/L等2倍率稀釋液系列。
【標(biāo)準(zhǔn)操作法】
向96孔微孔板內(nèi)添加100μl底物緩沖液和20μl樣品，在微孔板震蕩器上充分振蕩1分鐘后，37℃孵育15分鐘。
添加80μl反應(yīng)終止液，在微孔板震蕩器上充分振蕩1分鐘后，用酶標(biāo)儀測(cè)量405nm處的吸光值。同樣方法進(jìn)行空白(蒸餾水)對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)。
【活性單位的定義】
在pH9.8，37℃情況下，1分鐘內(nèi)生成1nmol p-硝基酚所需的酶的活性為1個(gè)活力單位（U）。
活性（U/μl）= C/15 ×a
C：由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的OD值(A實(shí)驗(yàn)值減去A空白值)，計(jì)算p-硝基酚濃度(mmol/L=nmol/μl)????? 15：反應(yīng)時(shí)間(min.)
a：樣品的稀釋倍數(shù)

當(dāng)樣品為成骨細(xì)胞時(shí)，使用本試劑盒前樣本需要預(yù)處理
在48孔板上進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)后，除去培養(yǎng)基，用PBS沖洗感光板，各孔添加150μl 0.05%的曲拉通X，進(jìn)行凍結(jié)→融化→凍結(jié)→融化操作。4℃，15,000rpm離心15分鐘處理，將上清液移到新的輔助管，以此作為樣品。
(注1）48孔板：培養(yǎng)時(shí)，一般不采用96孔板，多使用48孔板。
(注2) 曲拉通X的作用：溶解細(xì)胞膜，回收蛋白(細(xì)胞內(nèi)含有ALP蛋白)的試劑。
(注3) 反復(fù)的凍結(jié)融化：原理不明，但這樣做似乎可以提高ALP活性。
(注4) 也有不使用曲拉通X，用超聲波降解法(超聲波處理)對(duì)細(xì)胞造成物理性休克得到溶解產(chǎn)物的方法。
(注5) 曲拉通X的添加量：以150μL為例，孔中細(xì)胞約為20,000cell。

LabAssay™ Cholestero? 膽固醇定量檢測(cè)試劑盒
【摘要】
膽固醇是生物細(xì)胞膜的主要成分，是眾多動(dòng)物合成甾族化合物的前體物質(zhì)。
本品是利用N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺鈉(DAOS)，通過酶淺藍(lán)色顯色反應(yīng)，檢測(cè)血清等樣品中膽固醇量的試劑盒。與微孔板配套使用，可進(jìn)行多樣品檢測(cè)。
【檢測(cè)原理】
樣品中的膽固醇酯類在膽固醇酯酶作用下，被分解為游離膽固醇和脂肪酸。在這里生成的游離膽固醇與既存的游離膽固醇類一起被膽固醇氧化酶氧化，產(chǎn)生過氧化氫。生成的過氧化氫，在過氧化物酶作用下，與N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺鈉(DAOS) 及4-氨基安替比林定量氧化縮合，產(chǎn)生淺藍(lán)色色素。測(cè)量這個(gè)淺藍(lán)色色素的吸光值，即可計(jì)算出樣品中的膽固醇濃度。

LabAssay TM膽固醇 [膽固醇氧化酶、DAOS法]
【試劑盒組成】
緩沖液—————————–150ml×2瓶(MES緩沖液)
顯色劑———————-150ml用×2瓶
(溶解時(shí)：膽固醇酯酶，膽固醇氧化酶，過氧化物酶，DAOS，4-氨基安替比林，抗壞血酸氧化酶)
標(biāo)準(zhǔn)液—————————10ml用×1瓶
【性能】
靈敏度
蒸餾水作為樣品時(shí)，吸光值在0.11以下。
特定濃度的標(biāo)準(zhǔn)液(200mg/dl) 作為樣品時(shí)，吸光值為0.13～0.65。
?特異性
可檢測(cè)1,000mg/dl的總膽固醇濃度。
【檢測(cè)波長(zhǎng)】
主波長(zhǎng)：600nm, 副波長(zhǎng)：700nm
【試劑的配制】
顯色劑：將1瓶顯色劑(150mL用)溶解于1瓶緩沖液(150mL)中。
配制后，以2～10℃保存，可保存3星期。
【標(biāo)準(zhǔn)操作法】
向微孔板內(nèi)添加2μl樣品和300μl顯色劑，充分混合，在37℃孵育5分鐘。以此作為對(duì)照空白值，測(cè)量樣品及標(biāo)準(zhǔn)液的吸光值。

LabAssay™ Uric Acid? 尿酸定量檢測(cè)試劑盒
【摘要】
尿酸是嘌呤衍生物的代謝產(chǎn)物，血清中的尿酸是核蛋白的分解產(chǎn)物和食物性物質(zhì)，核蛋白代謝異常和腎臟機(jī)能障礙與尿酸量的變化存在聯(lián)系。本品是利用尿酸酶與N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3,5-甲基苯胺鈉(TOOS)，進(jìn)行酶促反應(yīng)生成青紫色色素，根據(jù)生成物質(zhì)的吸光值檢測(cè)血清中、尿中的尿酸量的試劑盒。與微孔板配套使用，可進(jìn)行多樣品檢測(cè)。
【檢測(cè)原理】
尿酸酶氧化樣品中的尿酸，產(chǎn)生過氧化氫。生成的過氧化氫，在過氧化物酶的作用下，與N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3,5-甲基苯胺鈉(TOOS) 及4-氨基安替比林定量氧化縮合，產(chǎn)生青紫色色素。測(cè)量這個(gè)青紫色色素的吸光值，計(jì)算出樣品的尿酸濃度。

LabAssay TM尿酸 [尿酸酶、TOOS法]
與微孔板配套使用，可用于小鼠血清中尿酸的檢測(cè)。
【特點(diǎn)】
蒸餾水作為樣品時(shí)，吸光值為0.15以下。
測(cè)量已知濃度的血清時(shí)，結(jié)果在已知濃度的±15％以內(nèi)。
【試劑盒組成】
緩沖液—————-100ml×4瓶(磷酸緩沖液(pH6.4),TOOS)
顯色劑————100ml用×4瓶
(溶解時(shí)：尿酸酶，過氧化物酶，4-氨基安替比林，脂蛋白脂肪酶，抗壞血酸氧化酶)
尿酸標(biāo)準(zhǔn)液————10ml×1瓶
【試劑的配制】
顯色劑：將1瓶顯色劑(100mL用)溶解于1瓶緩沖液(100mL)中。
配制后，2～10℃保存，可保存3星期。
【標(biāo)準(zhǔn)操作法】
向微孔板內(nèi)添加5μl樣品和300μl顯色劑，充分混合，37℃孵育5分鐘。以此作為空白對(duì)照值，測(cè)量樣品及標(biāo)準(zhǔn)液的吸光值。
【檢測(cè)波長(zhǎng)】
主波長(zhǎng)555nm(副波長(zhǎng)700nm)
【性能】
蒸餾水測(cè)量時(shí)的吸光值<0.15。
特定濃度標(biāo)準(zhǔn)液(尿酸10mg/dL)測(cè)量時(shí)的吸光值為0.04～0.26。

LabAssay™ A/G?? 白蛋白與球蛋白比值檢測(cè)試劑盒
【摘要】
白蛋白作為易溶于水的純蛋白，廣泛分布在生物體內(nèi)。在動(dòng)物血清中, 白蛋白占總蛋白的大部分，作用是維持滲透壓，與難溶于水的物質(zhì)(脂肪酸和膽紅素酸等)結(jié)合，負(fù)責(zé)這些物質(zhì)的運(yùn)輸。在血清蛋白質(zhì)中含量?jī)H次于白蛋白的是球蛋白，其作用是負(fù)責(zé)甾類激素等的運(yùn)輸。白蛋白和球蛋白占血清蛋白的大部分。通常情況下認(rèn)為白蛋白/球蛋白的比例保持在一定的范圍內(nèi)。不過，在肝臟和腎臟機(jī)能發(fā)生變化或處于某種疾病狀態(tài)中，白蛋白/球蛋白的比例會(huì)發(fā)生變化。
【檢測(cè)原理】
白蛋白（BCG法)
樣品受顯色劑作用，樣品中的白蛋白與溴甲酚綠(BCG)結(jié)合，產(chǎn)生淺藍(lán)色色素。測(cè)量這個(gè)淺藍(lán)色色素的吸光值，計(jì)算樣品中白蛋白的濃度。
總蛋白質(zhì)(雙縮脲法)
樣品受總蛋白顯色劑的作用，樣品中的蛋白與銅離子產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物。測(cè)量紫紅色絡(luò)合物的吸光值，計(jì)算樣品中總蛋白濃度。
球蛋白：總蛋白濃度減去白蛋白濃度，即可計(jì)算出樣品中球蛋白的濃度。白蛋白濃度和球蛋白濃度的比稱為白蛋白/球蛋白比(A/G比)。
*當(dāng)樣品是高脂肪血清時(shí)，請(qǐng)使用白蛋白修正緩沖液。
*高脂肪血清修正法
1) 在白蛋白測(cè)量中，當(dāng)樣品為高濃度乳濁血清時(shí)，請(qǐng)根據(jù)下列方法測(cè)量空白樣品值，從樣品的吸光值扣除進(jìn)行修正。 “樣品空白值測(cè)量法” 1μl血清加上250μl白蛋白修正緩沖液，充分混合后，作為對(duì)照品測(cè)量水在630nm處的吸光值。
2) 在總蛋白測(cè)量中，當(dāng)樣品為高濃度乳濁血清時(shí)，請(qǐng)根據(jù)下列方法測(cè)量空白樣品值，從樣品的吸光值扣除進(jìn)行修正。 “樣體空白值測(cè)量法”5μl血清加上250μl生理食鹽水，充分混合后，作為對(duì)照品測(cè)量水在540nm處的吸光值。

LabAssay TMA/G [BCG法、雙縮脲法]
本品是包含總蛋白顯色劑（基于雙縮脲法）、白蛋白顯色劑（基于BCG法）、標(biāo)準(zhǔn)血清的檢測(cè)試劑盒?？赏瑫r(shí)檢測(cè)總蛋白及白蛋白濃度，計(jì)算出白蛋白/球蛋白比。
【特點(diǎn)】
〈白蛋白〉
蒸餾水作為樣品時(shí)，吸光值為0.120～0.220。
測(cè)量已知濃度的血清時(shí)，結(jié)果在已知濃度的±12％以內(nèi)。
〈總蛋白〉
蒸餾水作為樣品時(shí)，吸光值為0.050～0.100。
測(cè)量已知濃度的血清時(shí)，結(jié)果在已知濃度的±10%以內(nèi)。
【試劑盒組成】
白蛋白顯色劑————-250ml×1瓶
總蛋白顯色劑———- –250ml×1瓶
標(biāo)準(zhǔn)血清———————3ml用×1瓶
白蛋白修正緩沖液——–25ml×1瓶

LabAssay™ Creatinine 肌氨酸酐定量檢測(cè)試劑盒
【摘要】
肌氨酸酐是肌肉中肌酸與ATP發(fā)生反應(yīng)后所生成的代謝產(chǎn)物。
肌氨酸酐大部分在腎臟循環(huán)時(shí)被過濾，不再被吸收而被排出體外。腎功能障礙和肌肉中能量代謝變化時(shí)，樣品中肌氨酸酐的量發(fā)生變化。
【檢測(cè)原理】
向樣品中加入除蛋白劑，離心分離，回收上清。上清中加入苦味酸及氫氧化鈉溶液，在堿性條件下，肌氨酸酐和苦味酸發(fā)生縮合，產(chǎn)生橙紅色的縮合物。測(cè)量這個(gè)橙紅色縮合物的吸光值，計(jì)算樣品中的肌氨酸酐濃度。
LabAssay (TM) 肌氨酸酐[Jaffe′法]研究試劑
肌氨酸酐是由存在于肌肉、神經(jīng)內(nèi)的磷酸肌酸直接產(chǎn)生，或由肌酸脫水產(chǎn)生，經(jīng)腎毛細(xì)血管球過濾后被排除體外的代謝產(chǎn)物。利用Jaffe法，在堿性條件下，通過檢測(cè)苦味酸與肌氨酸酐反應(yīng)生成的橙紅色色素檢測(cè)樣品中肌氨酸酐含量。
【特點(diǎn)】
蒸餾水作為樣品時(shí)，吸光值為0.010～0.020。
使用已知濃度的血清進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，在已知濃度的±10%以內(nèi)。
【試劑盒組成】
除蛋白劑…150ml×1瓶
苦味酸…50ml×1瓶
0.75mol/L 氫氧化鈉溶液…50ml×1瓶
標(biāo)準(zhǔn)液 (肌氨酸酐10mg/dl)…15ml×1瓶
【試劑的制備】
除蛋白劑?苦味酸?0.75mol/L 氫氧化鈉溶液:全部都可以直接使用
標(biāo)準(zhǔn)液: 附帶的標(biāo)準(zhǔn)液可直接使用，或稀釋后作為系列標(biāo)準(zhǔn)液。
【標(biāo)準(zhǔn)操作法】
將300μl除蛋白劑和50μl樣品在樣品管中混合，室溫放置10分鐘，離心分離(2,500rpm以上反應(yīng)10分鐘)，回收上清。
向酶標(biāo)板的孔中加入100μl上清，再加入50μl苦味酸和50μl 0.75mol/L氫氧化鈉溶液，在25～30℃反應(yīng)20分鐘。
作為空白對(duì)照，檢測(cè)樣品及標(biāo)準(zhǔn)液的吸光值。
【檢測(cè)波長(zhǎng)】 520nm

WAKO LabAssay系列試劑盒

編號(hào)?名稱?包裝
6390192 ?LabAssay™ A/G（白蛋白與球蛋白比值檢測(cè)試劑盒）?1000次
6590190 ?LabAssay™ Creatinine（肌氨酸酐定量檢測(cè)試劑盒）?500次
6570198 ?LabAssay™ Glucose（葡萄糖定量檢測(cè)試劑盒）?1000次
6360194 ?LabAssay™ NEFA（游離脂肪酸定量檢測(cè)試劑盒）?750次
6380196 ?LabAssay™ Phospholipid（磷脂定量檢測(cè)試劑盒）?1300次
6370190 ?LabAssay™ Triglyceride（甘油三酯定量檢測(cè)試劑盒）?1000次
5860191 ?LabAssay™ ALP（堿性磷酸酶定量檢測(cè)試劑盒）?900次
6580194?LabAssay™ Cholestero（膽固醇定量檢測(cè)試劑盒）?1000次
6400192?LabAssay™ Uric Acid（尿酸定量檢測(cè)試劑盒）?1300次
可用于人，大鼠以及小鼠血清樣本的檢測(cè)
（ 以上試劑盒僅為研究試劑，不可用于診斷或做其他用途。）