產(chǎn)品編號
JJP70
Human Leptin ELISA Kit
96次
3198
的Human Leptin ELISA Kit (Human Leptin Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即人瘦素酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的Leptin的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結果表明，最小檢出量為26.6pg/ml，與小鼠Leptin和大鼠Leptin等均沒有交叉反應，板內、板間變異系數(shù)均小于10%。
人瘦素蛋白(Leptin)是一種分子量在16kDa，長度為146個氨基酸的非糖基化多肽，主要參與調節(jié)脂肪組織體積和能量平衡。在人和小鼠體內，瘦素基因(OB)的失活突變會導致肥胖的發(fā)生。成熟的人Leptin與小鼠及大鼠Leptin分別具有87%和84%的氨基酸同源性。體內唯一能夠產(chǎn)生Leptin的細胞是脂肪細胞，Leptin的產(chǎn)生受到激素、細胞因子和營養(yǎng)物質的影響。例如胰島素和糖皮質激素會增強Leptin的表達，然而兒茶酚胺會抑制Leptin的表達。Leptin通常以游離形式存在于血漿中，能夠穿過血腦屏障，也能夠隨乳汁分泌出來。
人Leptin受體(ObR或LEPR)是一種分子量在150kDa，長度為1144個氨基酸的I型跨膜糖蛋白，屬于I類細胞因子受體家族中IL-6受體家族。ObR經(jīng)過酶切作用后會產(chǎn)生多種變體(ObRa、b、c、d)，每種變體具有不同長度的胞內段，同時還包括游離形式的受體ObRe。ObRb，具有完成胞內段，主要表達在下丘腦弓狀細胞核，是信號傳遞的必需分子。ObRa表達較為廣泛，其與ObRc、ObRd一起被認為是具有調節(jié)Leptin結合和內吞作用的受體，卻并不參與信號傳遞，它們的胞內段與ObRb相比較短。當與Leptin二聚體結合后，ObRb二聚體會與ObRa、ObRc或ObRd之一形成四聚體復合物，從而傳遞信號。ObRb的突變會產(chǎn)生肥胖表型的大鼠或小鼠，小鼠的受體基因突變發(fā)生在胞質區(qū)，而大鼠的基因突變則發(fā)生在受體的胞外域。Leptin會產(chǎn)生多種相反的濃度依賴性作用，例如Leptin能誘導神經(jīng)元細胞表達POMC、從而減少食物攝取；反之通過誘導NpY和AgRP的表達則會增加食物的攝取。
Leptin本質上來說是一種“饑餓信號”，Leptin濃度較低就會增強食欲減少能量消耗。在脂肪細胞體積增大時就會增加Leptin的分泌，從而導致食欲降低，能量消耗增多。然而，肥胖人群通常會有“瘦素抵抗”現(xiàn)象出現(xiàn)，這一部分是由于高濃度的甘油三酯造成的Leptin血-腦轉運體的飽和，另一部分是由于細胞對Leptin的響應降低所造成。還有很少一部分肥胖人群是由于遺傳性的Leptin缺陷導致。Leptin缺陷同樣會影響到免疫系統(tǒng)，會降低Th1細胞的應答，增加感染的發(fā)生幾率。因節(jié)食等多種原因而過度消瘦所造成的Leptin缺陷同樣也會對青春期發(fā)育產(chǎn)生影響。
瘦素受體與Leptin結合后通過招募JAK2使瘦素受體上的三個關鍵酪氨酸位點發(fā)生磷酸化，磷酸化的Tyr位點能夠招募STAT3并使之磷酸化激活，隨后發(fā)生二聚化進入細胞核發(fā)揮功能，啟動SOCS3和NpY等靶基因的表達；另外，SOCS3蛋白又能抑制激活的JAK2-STAT3通路，從而實現(xiàn)負反饋調節(jié)。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測樣品中人Leptin的濃度，其原理見圖1。人Leptin特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的人Leptin會與捕獲抗體結合。當加入生物素化的抗人Leptin抗體后，生物素化抗人Leptin抗體與人Leptin結合，形成夾心的免疫復合物。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。人Leptin濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中人Leptin濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
JJP70-1
人Leptin抗體預包被板
8孔×12條
JJP70-2
樣品分析緩沖液
5ml
JJP70-3
標準品稀釋液(5X)
10ml
JJP70-4
人Leptin標準品
2-4瓶
JJP70-5
人Leptin生物素化抗體
10ml
JJP70-6
辣根過氧化物酶標記Streptavidin
10ml
JJP70-7
洗滌液(20X)
30ml
JJP70-8
TMB溶液
10ml
JJP70-9
終止液
5ml
JJP70-10
封板膜(透明)
2張
JJP70-11
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
標準品4℃保存，1-2周內有效，-20℃保存6個月內有效；試劑盒其它組分4℃保存6個月內有效。除標準品外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結晶，如果發(fā)現(xiàn)有結晶，請室溫水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標準品的精確性，標準品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻對保證反應結果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。