NewZOL LS 總RNA提取試劑(NewZOL LS Reagent) 200ml品牌:JinPan | 貨號:EK-5303-200ml
功能與使用方法與life品牌的Trizol LS相似
【保存條件】
2-8℃長期保存
【操作方法】
I. 樣本處理
1. 組織樣本處理:用勻漿器或其他類似設(shè)備勻化組織樣本機械破壞裝置,每 500μL 最多使用 50 mg 組織NewZOL LS。 對于 DNA 含量高的組織(例如脾臟),建議使用 25 mg 組織/ 500μL 試劑。
2. 貼壁細胞樣本處理:除去細胞培養(yǎng)基,通過向培養(yǎng)皿(直徑 3.5 cm,10 cm2)中加入至少 1 mL NewZOLLS 并通過反復(fù)吸移來確保完全裂解。(根據(jù)培養(yǎng)皿面積而不是細胞數(shù)計算試劑量。試劑量不足將導(dǎo)致分離的 RNA 受到 DNA 污染。殘留的勻漿可以在-20 至-80°C 下保存至少一年,以備后用。)
3. 懸浮細胞樣本處理:沉淀細胞,并通過添加 NewZOL LS 直接裂解。 每 5×106個細胞至少加入 500μLNewZOL LS,移液器吹打數(shù)次裂解細胞。(添加 NewZOL LS 之前請勿洗滌細胞,細胞洗滌可能會導(dǎo)致 RNA降解。)
4. 液體樣本處理:每 200μL 液體樣品中加入 500μL NewZOL LS 進行均質(zhì)化和裂解。對于小于 200μL 的樣品體積,請?zhí)砑?500μLNewZOL LS 并加水至最終體積為 700μL。
5. 富含脂質(zhì)樣本處理:如上所述均質(zhì)化富含脂質(zhì)的樣品。將樣品以 12,000×g 離心 5 分鐘。 離心后,樣品頂部會出現(xiàn)一層脂肪。用移液器吸頭尖端刺穿上層,然后將上清液轉(zhuǎn)移到新管中。
II. RNA 提取
1. 每使用 500μLNewZOL LS 的裂解液中加入 200μL 無 RNase 的水至裂解液中。劇烈搖動樣品 15 秒鐘。在室溫下孵育 5 分鐘。(對于包含 50 mg 組織/ 500μL NewZOL LS 的樣品,建議在室溫下孵育 15 分鐘。)
2. 在室溫下以12,000×g離心樣品15分鐘。含有DNA,蛋白質(zhì)和多糖的半固體沉淀物形成在試管底部。RNA仍溶解在上清液中。
3. 將 500μL 上清液轉(zhuǎn)移至新管中。 勿吸太干凈防止污染,在 DNA /蛋白質(zhì)沉淀上方保留一小部分上清液。
(含有 DNA,蛋白質(zhì)和多糖的沉淀物占勻漿-水混合物總量的約 10%。)
4. 加入等體積異丙醇,上下顛倒混勻以沉淀 RNA,在室溫下孵育樣品 10 分鐘。
5. 將樣品以 12,000×g 離心 10 分鐘,除去并丟棄上清液。通常,在管的底部以白色沉淀的形式獲得 RNA。對于脾臟樣品,RNA 在試管底部形成凝膠狀膜。用乙醇洗滌后,膜變得更可見。
6. 加入 500μL 75% 乙醇(無 RNase 水配制)洗滌,輕彈管底使沉淀懸浮,上下顛倒混勻。對于較大的試管,按比例添加 75% 乙醇溶液。
7. 將沉淀以 8,000×g 的速度離心 3 分鐘。移液去除沉淀中的乙醇,重復(fù)乙醇洗滌步驟一次。靜置 5-10 分鐘待乙醇揮發(fā),無需過份干燥成固體,干燥成固體的 RNA 沉淀不易溶解
8. 將 RNA 沉淀溶于無 RNase 的水中,在室溫下渦旋 3 分鐘,以實現(xiàn)有效溶解。將得到的 RNA 進行檢測或-65℃長期保存(若需更長時間保存請?zhí)砑舆m量 RNA Chill(JP-8520))。
【注意事項】
1. RNA 酶污染注意事項:
a. 提取過程用品均經(jīng)過去 RNA 酶處理:玻璃制品可以 150 °C 烘烤 4 小時 ,塑料制品可浸泡于 0.5M NaOH 溶液后用清水沖洗并高壓滅菌,吸頭及離心管類盡量使用一次性無酶吸頭及離心管
b. 佩戴手套及口罩及護目鏡:皮膚上常含有細菌和霉菌,可污染 RNA 制備,且同時是 RNA 酶來源,同時 New ZOL LS 對皮膚有一定毒性,建議佩戴手套及口罩及護目鏡。
c. 盡量于通風櫥內(nèi)提?。罕苊馕胩崛∵^程中有毒物質(zhì)。
2. 安全性問題:
a. 本品在與皮膚接觸及吞咽有毒性,可導(dǎo)致燒傷。與皮膚接觸后,應(yīng)立即用洗滌劑和大量水沖洗。
如感到身體不適,應(yīng)立即就醫(yī)
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