產(chǎn)品編號(hào)

JP070197-60KU
蛋白G-微球菌核酸酶(pG-MNase)
60KU

518

JP070197-300KU
蛋白G-微球菌核酸酶(pG-MNase)
300KU

1968

生產(chǎn)的蛋白G-微球菌核酸酶，英文名為Protein G-MNase，簡稱pG-MNase，是Protein G與微球菌核酸酶MNase (Micrococcal Nuclease)的融合表達(dá)產(chǎn)物，同時(shí)具有Protein G的抗體結(jié)合活性和MNase的核酸內(nèi)切酶活性，常用于蛋白質(zhì)-DNA相互作用研究的ChIC (Chromatin Immunocleavage)和CUT&RUN (Cleavage Under Targets and Release Using Nuclease)。
同時(shí)提供蛋白A-微球菌核酸酶(pA-MNase) (JP070195)和蛋白AG-微球菌核酸酶(pAG-MNase) (JP070199)。
Protein A是一種發(fā)現(xiàn)于金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的細(xì)胞壁表面蛋白，分子量為42kDa；Protein G是C型或G型鏈球菌(Streptococcal bacteria)表達(dá)的免疫球蛋白結(jié)合蛋白。Protein A和Protein G功能相似，能特異性地與哺乳動(dòng)物免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig)結(jié)合，結(jié)合的部位通常為免疫球蛋白的Fc區(qū)，但有資料顯示Protein A也會(huì)和人VH3家族的Fab區(qū)結(jié)合，而Protein G有時(shí)與Fab區(qū)也有一定結(jié)合。同時(shí)，兩者對(duì)于不同的免疫球蛋白亞類的結(jié)合能力有所不同?？傮w來說，針對(duì)大多數(shù)抗體，Protein A和Protein G均具有廣泛的適用性，具體參考Protein A+G Agarose (Fast Flow, for IP) (JP2055)或BeyoMag? Protein A+G磁珠(JP2008)中的相關(guān)描述。
MNase (Micrococcal Nuclease)，也被稱為S7 Nuclease，是一種來源于金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的核酸內(nèi)切酶，在pH7.0-10.0和Ca2+的條件下可降解單鏈、雙鏈、線狀、環(huán)狀等多種形式的DNA或RNA，并產(chǎn)生3’磷酸末端的單核苷酸和寡核苷酸。MNase對(duì)單鏈核酸的切割效率比雙鏈核酸更高。MNase在腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U)的5’側(cè)的切割效率是鳥嘌呤(G)或胞嘧啶(C)的約30倍，能較好地酶解富含AT或AU區(qū)域，所以MNase是“相對(duì)”非特異性的核酸內(nèi)切酶，常用于去除細(xì)胞裂解液中的核酸等。另外，MNase僅酶解核小體連接區(qū)的DNA，而核小體上的DNA被組蛋白保護(hù)而不被MNase酶解。本產(chǎn)品MNase由自主研發(fā)的PerfectProtein?技術(shù)平臺(tái)表達(dá)、純化，表達(dá)純化獲得的重組蛋白，與天然Staphylococcus aureus的MNase氨基酸序列完全一致，與天然微球菌核酸酶相比在生化特性方面相同。
本產(chǎn)品是Protein G與MNase的融合表達(dá)產(chǎn)物，同時(shí)具有Protein G結(jié)合抗體和MNase核酸內(nèi)切酶的雙重活性。
CUT&RUN，是Cleavage Under Targets and Release Using Nuclease的首字母縮寫，中文名為核酸酶靶向切割和釋放，是一種快速、有效、可靠的用于檢測細(xì)胞中蛋白質(zhì)與DNA相互作用的技術(shù)方法。其主要原理是，將細(xì)胞固定在刀豆素A磁珠(ConA磁珠)上，然后用去垢劑如洋地黃皂苷(Digitonin)通透細(xì)胞膜，加入特異性的一抗和Protein A-MNase或Protein G-MNase，一抗募集pA-MNase或pG-MNase到染色質(zhì)的靶蛋白上，然后通過適量濃度的Ca2+來激活MNase，從而切割靶蛋白兩側(cè)的DNA并釋放切割下來的基因組DNA，后續(xù)經(jīng)純化、富集的切割下來的基因組DNA片段可通過qPCR檢測和定量，也可用于二代測序(NGS)分析。相比于傳統(tǒng)染色質(zhì)免疫沉淀(Chromatin immunoprecipitation, ChIP)，CUT&RUN具有節(jié)省時(shí)間、所需樣品少、NGS測序背景低、實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，目前廣泛用于基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控和表觀遺傳研究[1-3]。
本產(chǎn)品降解核酸效果如下圖所示。

圖1. 的蛋白G-微球菌核酸酶(pG-MNase) (JP070197)降解核酸的效果圖。在20μl反應(yīng)體系中(50mM Tris pH8.0, 5mM CaCl2)，加入1μg Lambda DNA及相應(yīng)量的本產(chǎn)品，37℃孵育15分鐘，反應(yīng)完畢后立即置于冰浴，并加入1μl 0.5M EDTA pH8.0以終止反應(yīng)。加入4μl DNA上樣緩沖液(6X) (D0071)，電泳檢測。實(shí)際效果會(huì)因樣品種類、檢測儀器等的不同而存在差異，圖中效果僅供參考。
活性定義：One Agarose Gel Unit is defined as the amount of enzyme required to digest 1μg of Lambda DNA in 15 minutes at 37℃, to the extent that the accumulation of low molecular DNA fragments is <400 base pairs as determined by agarose gel electrophoresis. Another Unit is Kunitz Unit. One Kunitz Unit is defined as the amount of enzyme required to release acid soluble oligonucleotides that produce an absorbance increase of O.D. 1.0 at 260nm in 30 minutes at 37℃. 1000 Agarose Gel Units is approximately equal to 100 Kunitz Units. 酶儲(chǔ)存溶液：5mM Tris (pH7.4), 50mM NaCl, 1mM EDTA, 50% Glycerol. 本產(chǎn)品用于CUT&RUN實(shí)驗(yàn)時(shí)，按每個(gè)反應(yīng)使用1.5μl pG-MNase (2000 gel units/μl)來計(jì)算，本產(chǎn)品小包裝可以進(jìn)行20次反應(yīng)，中包裝可以進(jìn)行100次反應(yīng)。 包裝清單： 產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱 包裝 JP070197-60KU pG-MNase (2000 gel units/μl) 30μl JP070197-300KU pG-MNase (2000 gel units/μl) 150μl — 說明書 1份 保存條件： -20℃保存，一年有效。 注意事項(xiàng)： 本品含50%甘油，-20℃保存不會(huì)凍結(jié)。須避免-80℃保存，否則會(huì)凍結(jié)，反復(fù)凍融可能會(huì)影響酶的活性。 本品較為粘稠，吸取時(shí)注意取樣量準(zhǔn)確，加樣后請(qǐng)注意充分吹打混勻，避免產(chǎn)生氣泡。 Ca2+是MNase的關(guān)鍵催化輔助因子，反應(yīng)緩沖液含有1-5mM Ca2+對(duì)MNase的酶活性是必須的，反應(yīng)溶液中如有EDTA、EGTA等金屬離子螯合劑會(huì)影響酶活性。 反應(yīng)溶液中鹽離子濃度須低于100mM，過高的鹽濃度會(huì)影響MNase的酶活性。 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。