產(chǎn)品編號

JJJP7
Mouse NGAL/Lipocalin-2 ELISA Kit
96次

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的Mouse NGAL/Lipocalin-2 ELISA Kit (Mouse Neutrophil Gelatinase-Associated Lipocalin/Lipocalin-2 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測小鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的NGAL的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為7.9pg/ml，與人Lipocalin-2、Lipocalin-1及大鼠的Lipocalin-2等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(Neutrophil Gelatinase-Associated Lipocalin, NGAL)，又稱脂質(zhì)運載蛋白2 (Lipocalin-2)，是一種分子量為25kDa的糖蛋白，屬于Lipocalin家族，同時也是嗜中性粒細(xì)胞顆粒的組成部分。在炎癥期間，NGAL主要由巨噬細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞和上皮細(xì)胞合成。NGAL能夠參與固有免疫應(yīng)答、細(xì)胞分化、腫瘤生成和細(xì)胞存活等多種過程。NGAL能以單體形式、同源二聚體形式存在，也能夠與MMP-9組成異質(zhì)二聚體。成熟的小鼠NGAL與人的和大鼠的NGAL分別有62%和81%的同源性[1]。
NGAL能夠與細(xì)菌分泌出的兒茶酚胺鐵載體結(jié)合，抑制細(xì)菌鐵離子吸收，因此在固有免疫中NGAL能夠作為抑菌劑發(fā)揮作用。TLR4激活會誘導(dǎo)免疫細(xì)胞和上皮細(xì)胞產(chǎn)生NGAL。部分細(xì)菌通過產(chǎn)生修飾后的鐵載體使得NGAL無法與之結(jié)合，從而逃避免疫清除。哺乳動物細(xì)胞經(jīng)由NGAL介導(dǎo)的鐵離子的吸收對于一些鐵離子敏感基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控具有重要影響。在腎臟中，NGAL介導(dǎo)的鐵離子運輸對于保護腎臟免受損傷十分必要[2]。
在一些非細(xì)菌性炎癥中，NGAL的表達也會有所增加，例如牛皮癬、潰瘍性結(jié)腸炎和肥胖脂肪組織中。NGAL還能夠促進肝細(xì)胞的胰島素抵抗[3]。此外，在貧血和缺氧條件下，NGAL表達也會上調(diào)，其能夠抑制紅細(xì)胞的分化過程。在一些腫瘤病灶或腫瘤相關(guān)基質(zhì)中，NGAL表達也會上調(diào)，但是其對腫瘤的具體作用取決于具體的腫瘤類型和所處的微環(huán)境狀態(tài)。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中小鼠NGAL/Lipocalin-2的濃度，其原理見圖1。小鼠NGAL/Lipocalin-2特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的小鼠NGAL/Lipocalin-2會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗小鼠NGAL/Lipocalin-2抗體后，生物素化抗小鼠NGAL/Lipocalin-2抗體與小鼠NGAL/Lipocalin-2結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。小鼠NGAL/Lipocalin-2濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度。

圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：

產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝

JJJP7-1
小鼠NGAL/Lipocalin-2抗體預(yù)包被板
8孔×12條

JJJP7-2
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(5X)
60ml

JJJP7-3
小鼠NGAL/Lipocalin-2標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶

JJJP7-4
小鼠NGAL/Lipocalin-2生物素化抗體
10ml

JJJP7-5
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml

JJJP7-6
洗滌液(20X)
30ml

JJJP7-7
TMB溶液
10ml

JJJP7-8
終止液
5ml

JJJP7-9
封板膜(透明)
2張

JJJP7-10
封板膜(白色)
2張

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說明書
1份

保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效，試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。