產(chǎn)品編號(hào)
JJP73
Progesterone ELISA Kit
96次
3198
的Progesterone ELISA Kit (Progesterone Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即孕酮酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測所有哺乳動(dòng)物血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的孕酮的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為0.01ng/ml，與11-脫氧皮質(zhì)酮、孕烯醇酮、17-α-羥基孕酮、腎上腺酮分別具有1.1%、0.35%、0.3%和0.2%的交叉反應(yīng)性，與雌二醇、雌三醇等其他類似固醇類小分子化合物交叉反應(yīng)性也小于0.1%或0.02%。
孕酮(Progesterone)，又稱黃體酮、孕甾酮、黃體甾酮、黃體激素等，是一種類固醇孕激素，是維持雌性哺乳動(dòng)物正常生殖功能必不可少的激素之一，主要由黃體產(chǎn)生分泌。孕酮能夠作用于多種組織和器官，例如腦、乳房、子宮、卵巢以及宮頸。孕酮在體內(nèi)具有復(fù)雜的生理作用，作用于同一組織的不同細(xì)胞也會(huì)產(chǎn)生不同的效應(yīng)，在生理和病理?xiàng)l件下，孕酮的作用也截然不同。例如，在乳腺癌和子宮平滑肌瘤中，孕酮能促進(jìn)腫瘤的發(fā)展和惡化。然而在子宮內(nèi)膜癌中，孕酮?jiǎng)t展現(xiàn)出了一定的抑癌作用。造成這種現(xiàn)象的具體原因目前尚不清楚，有一種可能是由于不同組織特殊環(huán)境中的某些特定因子、受體表達(dá)以及旁分泌和自分泌過程影響了孕酮的作用效果。
孕酮主要在孕酮受體(Progesterone Receptor, PR)的參與下發(fā)揮作用，與雌激素受體一樣，孕酮受體也被認(rèn)為是一種核轉(zhuǎn)錄因子，通過激活啟動(dòng)子區(qū)域的孕酮響應(yīng)元件(Progesterone?Response?Element,?PRE)實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控。孕酮受體還能與SP1、AP1、FOXO1和NF-κB的JP5亞基等其他轉(zhuǎn)錄因子相互作用，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄活性。孕酮受體主要存在兩種亞基，PR-A和PR-B，其中PR-A不僅能夠產(chǎn)生和PR-B相反的調(diào)控效果，還能影響孕酮及糖皮質(zhì)激素受體作用。例如PR-A能夠抑制雌激素升高體內(nèi)維生素D的活性，從而抑制雌激素對(duì)骨密度的調(diào)節(jié)。
除了參與調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄外，孕酮還能夠激活一系列信號(hào)通路，例如cAMP/PKA、MAPK和PI3K/Akt，通過對(duì)這些信號(hào)通路的影響，從而發(fā)揮其神經(jīng)保護(hù)功能。
本試劑盒采用競爭法ELISA (Competitive?ELISA)檢測樣品中孕酮的濃度，其原理見圖1。高特異性識(shí)別孕酮的抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，同時(shí)加入樣品和辣根過氧化物酶標(biāo)記孕酮，樣品中的孕酮與辣根過氧化物酶標(biāo)記孕酮競爭性結(jié)合酶標(biāo)板中包被的抗體，隨后洗去游離的孕酮與游離的辣根過氧化物酶標(biāo)記孕酮。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會(huì)催化無色的TMB氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。如果樣本中孕酮含量越多，則與抗體結(jié)合的辣根過氧化物酶標(biāo)記孕酮就越少，顏色越淺，即顏色與樣品中的濃度成反比。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測。孕酮濃度與A450值呈反比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中孕酮濃度。
圖1. 競爭法ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進(jìn)行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
JJP73-1
Progesterone抗體預(yù)包被板
8孔×12條
JJP73-2
Progesterone標(biāo)準(zhǔn)品
2管
JJP73-3
樣品稀釋液
16ml
JJP73-4
辣根過氧化物酶標(biāo)記Progesterone
2-4瓶
JJP73-5
洗滌液(20X)
30ml
JJP73-6
TMB溶液
10ml
JJP73-7
終止液
5ml
JJP73-8
封板膜(透明)
2張
JJP73-9
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
辣根過氧化物酶標(biāo)記Progesterone 4oC保存，1-2周內(nèi)有效，-20oC保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4oC保存6個(gè)月內(nèi)有效。除辣根過氧化物酶標(biāo)記Progesterone外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于辣根過氧化物酶標(biāo)記Progesterone一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以具體瓶數(shù)請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證辣根過氧化物酶標(biāo)記Progesterone的精確性，辣根過氧化物酶標(biāo)記Progesterone復(fù)溶后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨(dú)立測試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。