產(chǎn)品編號
JJP82
Testosterone ELISA Kit
96次
3198
的睪酮 ELISA Kit (Testosterone Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即睪酮酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測所有哺乳動物血清、血漿或細胞培養(yǎng)上清液中的睪酮的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復性好。多次重復檢測結(jié)果表明，最小檢出量為0.07ng/ml，與雄烯二酮和雄甾酮具有0.9%的交叉反應性，與5-α-二氫睪酮、17-α-雌二醇和雌激素酮等其他類似固醇類小分子交叉反應性均小于0.05%，與氫化可的松交叉反應性小于0.005%。
睪酮(Testosterone)，又稱睪丸素、睪丸酮、睪甾酮等，是一種類固醇雄激素，主要由睪丸間質(zhì)細胞產(chǎn)生，其代謝產(chǎn)物有兩種，分別是二氫睪酮(Dihydrotestosterone,?DHT)和雌二醇(Estradiol)。睪酮主要參與精子形成以及第一、第二性征的發(fā)育和維持，除此之外，睪酮同樣參與免疫抑制、骨密度調(diào)節(jié)、血管舒張、突觸可塑性以及前列腺癌和糖尿病等生理病理過程。和其它類固醇類激素相同，睪酮的產(chǎn)生也受到垂體激素的調(diào)控。當受到促性腺激素釋放激素(Gonadotropin?Releasing?Hormone,?GnRH)的刺激后，垂體前葉首先分泌黃體生成素(Luteinizing?Hormone,?LH)，LH作用于睪丸間質(zhì)細胞膜受體，經(jīng)由cAMP依賴膽固醇合成途徑誘導睪酮合成。促卵泡激素(Follicle?Stimulating Hormone,?FSH)通過作用于精原細胞能夠間接影響睪丸間質(zhì)細胞的功能和類固醇生成。睪酮和GnRH之間存在著負反饋調(diào)節(jié)現(xiàn)象。成年男性每天大約產(chǎn)生5mg的睪酮，大多數(shù)睪酮都與性激素結(jié)合球蛋白或白蛋白結(jié)合，游離的睪酮和白蛋白結(jié)合睪酮都具有一定的生物活性。
游離睪酮能夠穿過細胞膜，與胞質(zhì)內(nèi)的雄激素受體(Androgen Receptor, AR)作用，形成的復合物能夠進入細胞核影響DNA轉(zhuǎn)錄。AR的活化還能激活蛋白激酶，引起細胞Ca2+內(nèi)流。在5-α還原酶作用下，睪酮會變成二氫睪酮，與睪酮相比，二氫睪酮與AR的親和力更高。在芳香化酶的作用下，睪酮還能轉(zhuǎn)變?yōu)榇贫迹c相應的雌激素受體結(jié)合，作用于特定組織。
本試劑盒采用競爭法ELISA (Competitive?ELISA)檢測樣品中睪酮的濃度，其原理見圖1。高特異性識別睪酮的抗體已預包被于酶標板上，同時加入樣品和辣根過氧化物酶標記睪酮，樣品中的孕酮與辣根過氧化物酶標記睪酮競爭性結(jié)合酶標板中包被的抗體，隨后洗去游離的睪酮與游離的辣根過氧化物酶標記睪酮。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的TMB氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。如果樣本中睪酮含量越多，則與抗體結(jié)合的辣根過氧化物酶標記睪酮就越少，顏色越淺，即顏色與樣品中的濃度成反比。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。睪酮濃度與A450值呈反比，通過繪制標準曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中睪酮濃度。
圖1. 競爭法ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
JJP82-1
Testosterone抗體預包被板
8孔×12條
JJP82-2
Testosterone標準品
2管
JJP82-3
樣品稀釋液
16ml
JJP82-4
辣根過氧化物酶標記Testosterone
2-4瓶
JJP82-5
洗滌液(20X)
30ml
JJP82-6
TMB溶液
10ml
JJP82-7
終止液
5ml
JJP82-8
封板膜(透明)
2張
JJP82-9
封板膜(白色)
2張
–
說明書
1份
保存條件：
辣根過氧化物酶標記Testosterone4oC保存，1-2周內(nèi)有效，-20oC保存6個月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4oC保存6個月內(nèi)有效。除辣根過氧化物酶標記Testosterone外，試劑盒其它組分嚴禁凍存。
注意事項：
由于辣根過氧化物酶標記Testosterone一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準，所以具體瓶數(shù)請以實際收到的試劑盒為準。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證辣根過氧化物酶標記Testosterone的精確性，辣根過氧化物酶標記Testosterone復溶后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應結(jié)果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結(jié)果誤差較大。
檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。