產(chǎn)品編號
JJP85
Rat TIMP-1 ELISA Kit
96次
3398
的Rat TIMP-1 ELISA Kit (Rat Tissue Inhibitors of Metalloproteinases 1 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即大鼠金屬蛋白酶組織抑制劑1酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測大鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的TIMP-1的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測靈敏度高，特異性強，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測結(jié)果表明，最小檢出量為24pg/ml，與人TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3、TIMP-4, 小鼠TIMP-1等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix Metalloproteinases, MMPs)是一種具有鋅指結(jié)構(gòu)的肽鏈內(nèi)切酶，能夠催化細(xì)胞外基質(zhì)蛋白發(fā)生降解，從而調(diào)控發(fā)育、組織重構(gòu)、傷口愈合和腫瘤轉(zhuǎn)移等過程。MMPs以酶原形式分泌，酶原經(jīng)過蛋白水解后變成有活性的MMPs。金屬蛋白酶組織抑制劑(Tissue Inhibitors of Metalloproteinases, TIMP)通過與MMPs形成1:1的復(fù)合物抑制MMPs活性。TIMPs與MMPs以非共價鍵相連，能夠阻止MMP與底物連接。TIMP-1屬于誘導(dǎo)型蛋白而TIMP-2屬于組成型蛋白，二者都屬于游離蛋白且分布廣泛；TIMP-3主要分布在細(xì)胞外基質(zhì)，TIMP-4則只存在于心肌組織。
TIMP-1是一種氨基酸長度為184的糖基化蛋白，但糖基化并非維持其活性所必須。TIMP-1具有12個半胱氨酸殘基，參與形成結(jié)構(gòu)中的二硫鍵，分子N端具有與MMP底物結(jié)合位點相結(jié)合的基團，C端則能夠與MMP外部結(jié)合，增強整體的親和力。TIMP-1與無活性的pro-MMP-9具有很強的結(jié)合能力，在與pro-MMP-9形成復(fù)合物后，TIMP-1憑借N端的結(jié)合位點依舊保持著抑制其他活化MMP的能力。
許多細(xì)胞和組織都能夠合成TIMP-1。TIMP-1基因的轉(zhuǎn)錄受到IL-1、IL-6、OSM、LIF和TNF-α等許多細(xì)胞因子和佛波酯的調(diào)控。TIMP-1的許多生理功能都與MMPs密切相關(guān)，MMP/TIMP-1濃度失衡會導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎、腫瘤生長和轉(zhuǎn)移等病理改變。另一方面，TIMP-1也具有一些獨立的功能，例如TIMP-1能夠抑制B細(xì)胞的凋亡，說明TIMP-1除了抑制MMPs外，還能夠與一些特定細(xì)胞結(jié)合并進入細(xì)胞核內(nèi)，促進特定細(xì)胞的存活和生長。
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中大鼠TIMP-1的濃度，其原理見圖1。大鼠TIMP-1特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時，其中的大鼠TIMP-1會與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗大鼠TIMP-1抗體后，生物素化抗大鼠TIMP-1抗體與大鼠TIMP-1結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin (HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。大鼠TIMP-1濃度與A450值呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中大鼠TIMP-1濃度。
圖1. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測，可以進行96次檢測。
包裝清單：
產(chǎn)品編號
產(chǎn)品名稱
包裝
JJP85-1
大鼠TIMP-1抗體預(yù)包被板
8孔×12條
JJP85-2
樣品分析緩沖液
5ml
JJP85-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(5X)
10ml
JJP85-4
大鼠TIMP-1標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
JJP85-5
大鼠TIMP-1生物素化抗體
10ml
JJP85-6
辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
JJP85-7
洗滌液(20X)
30ml
JJP85-8
TMB溶液
10ml
JJP85-9
終止液
5ml
JJP85-10
封板膜(透明)
2張
JJP85-11
封板膜(白色)
2張
—
說明書
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效；試劑盒其它組分4℃保存6個月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組分嚴(yán)禁凍存。
注意事項：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請勿再次使用。
TMB溶液請勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時，請注意每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過獨立測試，所以請勿混用不同貨號和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個試劑盒同時檢測時，請獨立使用各個試劑盒中的試劑，請勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會導(dǎo)致最終檢測到的吸光度顯著下降。
洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測結(jié)果的可信度。
加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。