產(chǎn)品編號(hào)
PI332
Porcine IL-6 ELISA Kit
96次
3198
的Porcine IL-6 ELISA Kit (Porcine Interleukin 6 Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即豬白細(xì)胞介素6酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試劑盒，是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)豬血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-6的ELISA試劑盒。
本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，最小檢出量為114pg/ml，與人、小鼠、大鼠的IL-6等均沒(méi)有交叉反應(yīng)，板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
白細(xì)胞介素-6?(Interleukin?6, IL-6)，是一種多功能、呈α螺旋、易于磷酸化和糖基化的細(xì)胞因子，分子量為22-28KD。IL-6在免疫反應(yīng)、炎癥、血細(xì)胞生成、骨代謝、細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)、存活和分化、以及腫瘤等疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中有重要作用。成熟的豬IL-6具有183個(gè)氨基酸，與人、小鼠、大鼠IL-6分別具有58%、39%和39%的氨基酸同源性。能夠表達(dá)IL-6的細(xì)胞主要有CD8+T細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、滑膜細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、巨核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、交感神經(jīng)元細(xì)胞、大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞、腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞、肥大細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、成熟的星形膠質(zhì)細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和胰島β細(xì)胞等。IL-6的產(chǎn)生通常與細(xì)胞激活以及糖皮質(zhì)激素、兒茶酚胺和性激素的調(diào)控相關(guān)。
IL-6的受體是由細(xì)胞表面的IL-6Rα和gp130亞基組成的異二聚體。IL-6與IL-6Rα結(jié)合后引發(fā)IL-6Rα與gp130的二聚化，從而激活下游的信號(hào)通路，主要包括JAK/STAT信號(hào)通路、Ras信號(hào)通路以及PI3K信號(hào)通路。IL-6Rα和gp130組成了IL-6的受體復(fù)合物，而gp130也是CLC、CNTF、CT-1、IL-11、IL-27、LIF、OSM等的受體復(fù)合物的組分。IL-6的信號(hào)通路圖見(jiàn)圖1
圖1. IL-6的信號(hào)通路示意圖
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich?ELISA)檢測(cè)樣品中豬IL-6的濃度，其原理見(jiàn)圖2。豬IL-6特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的豬IL-6會(huì)與捕獲抗體結(jié)合。當(dāng)加入生物素化的抗豬IL-6抗體后，生物素化抗豬IL-6抗體與豬IL-6結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin?(HRP-Streptavidin)，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲。最后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。豬IL-6濃度與A450值呈正比，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中豬IL-6濃度。
圖2. 雙抗體夾心ELISA原理圖。
一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)，可以進(jìn)行96次檢測(cè)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
PI332-1
豬 IL-6抗體預(yù)包被板
8孔×12條
PI332-2
樣品分析緩沖液
5ml
PI332-3
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10ml
PI332-4
豬 IL-6標(biāo)準(zhǔn)品
2-4瓶
PI332-5
豬 IL-6生物素化抗體
10ml
PI332-6
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin
10ml
PI332-7
洗滌液(20X)
30ml
PI332-8
TMB溶液
10ml
PI332-9
終止液
5ml
PI332-10
封板膜(透明)
2張
PI332-11
封板膜(白色)
2張
–
說(shuō)明書(shū)
1份
保存條件：
標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效；試劑盒其它組份4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效。除標(biāo)準(zhǔn)品外，試劑盒其它組份嚴(yán)禁凍存。
注意事項(xiàng)：
由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn)，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn)。
洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制工作液。
為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用。
TMB溶液請(qǐng)勿接觸氧化劑和金屬，否則容易失效。
加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。
由于本試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試，所以請(qǐng)勿混用不同貨號(hào)和不同批次的試劑盒組分，即使是同種試劑盒不同批次的試劑盒組分也不能混用。多個(gè)試劑盒同時(shí)檢測(cè)時(shí)，請(qǐng)獨(dú)立使用各個(gè)試劑盒中的試劑，請(qǐng)勿使用不同試劑盒中相同名稱的組分。
充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板，以保證混勻。
本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致最終檢測(cè)到的吸光度顯著下降。
洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大。
檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。