ChIP-Seq 核裂解液品牌：JinPan | 貨號(hào)：JP-8145-100ml

ChIP-Seq Nuclear Lysis buffer

【保存條件】 

-20 ℃保存，有效期 12 個(gè)月 

【概述】 

本品適用于小片段（5-500bp）單鏈 DNA 的雜交反應(yīng)，獲得更優(yōu)質(zhì)的雜交雙鏈 DNA 片段，如 shRNA、gRNA 載體等構(gòu)建。 

【操作方法】 

1. 收獲細(xì)胞核后，將細(xì)胞核重懸于 3-5 倍體積的冰冷的 ChIP-Seq 核裂解緩沖液中（5 倍體積取決于細(xì)胞核 提取過(guò)程中細(xì)胞裂解液用量，如細(xì)胞裂解液用量為 100μl 則加入 500μl ChIP-Seq 核裂解液） 

2. 將試管在冰上孵育 20 分鐘。 

3．從每個(gè)樣品中取 5 μL 等分試樣，并用 15 μL TE 稀釋以用于分析凝膠確認(rèn)。（注：將剩余保存在冰上或 凍-20 ℃，直到需要為止。該樣品用于確認(rèn)染色質(zhì)在分離前是完整的。） 

4. 將試管放入設(shè)定為 2°C 的超聲浴中, 調(diào)節(jié)水位，使管子剛好接觸杯墊的表面。。 如用 Misonix 431A 對(duì)每個(gè)試管進(jìn)行 300 μl 的超聲處理非常穩(wěn)定，因此我們建議將較大的樣品分成多個(gè)試管進(jìn)行超聲處理。將至少兩個(gè)和多達(dá) 8 個(gè)試 管放入超聲儀的試管支架中。 

5. 用 10 秒的脈沖和 10 秒的靜止時(shí)間以 20 的振幅對(duì)樣品進(jìn)行超聲處理，總超聲時(shí)間為 30 分鐘。 

6. 從超聲儀中取出樣品，并保存在冰上。 

7. 取 5 μl 樣品，并用 15 μl TE 稀釋以用于分析凝膠。 

8. 在 37°C 下，用 10 μg RNase A 樣品 15 分鐘。 

9. 在 65°C 下用 20 μg 蛋白酶 K 樣品 30 分鐘。 

10. 在 95°C 下反向交聯(lián) 5 分鐘，使樣品緩慢冷卻至室溫。 需要執(zhí)行這些步驟以確保 DNA 在瓊脂糖凝膠上的正確遷移。否則，將發(fā)生比預(yù)期高得多的分子量的涂污或遷移。 

11. 將加樣染料添加到每個(gè)樣品中，并在 TAE 運(yùn)行緩沖液中的 1％瓊脂糖凝膠上分離樣品。 

12. 凝膠成像儀下觀察瓊脂糖凝膠上的 DNA 樣品。 剪切染色質(zhì)的大小應(yīng)在 200 至 500 bp 之間。 

13. 若步驟 12 完成后鑒定可行，將步驟 6 中其余樣品在 4°C 下以 16,000 g 的速度離心 10 分鐘，以去除不 溶物。 

14. 將可溶的剪切染色質(zhì)轉(zhuǎn)移到新鮮的 1.5ml 離心管中。 染色質(zhì)可以在液氮中冷凍，并在-80°C 下保存直至需要。 

15．按上述方法用 RNase A，蛋白酶 K 和交聯(lián)逆轉(zhuǎn)處理等分試樣（步驟 8-10）。 

16．使用 QIAquick PCR 純化試劑盒純化染色質(zhì)，并使用 NanoDrop 等測(cè)量 DNA 濃度。 

【注意事項(xiàng)】 

1. 如果每次的使用量很小，可以適當(dāng)分裝后再使用，以免污染。 

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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